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人角膜缘干细胞原代培养的研究 中文摘要 目的：探讨入角膜缘干细胞的培养、鉴定方法。以及人角膜缘干细胞的形态学观察， 为临床上应用角膜缘干细胞进行相关治疗奠定基础。 方法：取我院眼科2007年手术病人的角膜缘组织。按组织块所取的大小，将其分为 两组：其中，I组为翼状胬肉患者6例，显微镜下取其一小块角膜缘组织，大约为(1xl 咖)。II组为摘眼球患者(绝对期青光眼3例，角膜溃疡穿孔2例)5例，取其环周 角膜缘组织。两组以相同的方法进行培养，即： (1)都是组织块培养法 II 的生长因子、lOOu／ml青霉素和100 g／m1链霉素l：1混合的双抗液、37C温室培 养箱。 对人自体角膜缘干细胞进行体外培养，倒置显微镜观察培养细胞体外生长的形态， 对培养出的细胞用抗角蛋白K3的单克隆抗体AE5进行鉴定。 结果：本实验首先对I组6例小组织块进行体外细胞培养，无一例出现细胞生长。为 了寻找细胞不生长的原因，我们取II组5例病人的环周角膜缘组织块以完全相同的方 法进行培养，发现均有细胞生长。 我们对培养出的细胞进行形态学观察及鉴定。培养2天后观察发现：细胞体积较 小，呈类圆形。4天后观察：细胞排列呈单层，密度均匀，细胞表面有呈长梭形成纤 维细胞。。6天后观察。细胞近贴满瓶底，细胞体积增大，呈类圆形、多角形等，细胞 核为单核或多核。我们用角蛋白K3的单克隆AE5抗体染色，大多数细胞染色阳性， 仅少数细胞染色阴性。 结论： 1，组织块培养法：小块组织块培养无细胞生长，环周角膜缘组织块培养法可 以培养出角膜缘干细胞，但培养出来的干细胞数量较少。 2，角蛋白K3的单克隆抗体hE5可作为鉴定角膜缘干细胞的方法。 关键词：人角膜缘干细胞细胞培养体外鉴定 4 abouthumancorneaIIimbalstem Theresearch in culture cells primary Abstract andidentifitionmethodof limbusofcorneastem cellculture Purpose：Toapproach person cells．Andhumancomeallimbalstemcellswereobservatedin clinical morphology．For limbal the fortreatment． of stemcells foundation application lay Methods：Limbalwerefetchedfrom in2007． Ophthalmic organizations surgerypatients Of the asmall oflimbalchoice werefetched these，under microscopepiece organizations from ofsix for week pterygiumpatientscases，somethe(1xlmm)．Limbalorganizations werefetch