低剂量肿瘤坏死子预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.pdf

中文摘要 低剂量肿瘤坏死因子预处理对肝脏缺血再灌注损伤 的保护作用 摘 要 目的：组织缺血再灌注损伤的发生、发展是个多因素协 同作用的过程。大量文献报道其发生可能与氧自由基、钙超 载、中性粒细胞因素有关。近年来，研究发现多种细胞因子 也参与肝缺血再灌注损伤的病理生理的过程。这些细胞因子 在肝内既可以单个形式也可通过彼此之间网络状的协同作 用的形式而引起肝脏损伤。其中，肿瘤坏死因子a(tumor necrosisfactor alpha，TNF-a)作为炎症反应的始发细胞因子， 在肝脏缺血再灌注损伤中的作用越来越引起人们的关注。目 前研究普遍认为，TNF-a在肝脏缺血再灌注中导致损伤加重， 但是最近研究发现，在缺血再灌注前应用低剂量的TNF．a进 行预处理有一定的肝保护作用。在肝脏缺血再灌注前30分 钟，给予低剂量的(1～靴g／kg体重)TNF．a预处理可以降低 缺血再灌注后肝脏和血浆中的TNF-a的表达，降低血清中谷 丙转氨酶的检验水平，明显减轻肝脏损伤。Teoh等的研究证 明，对n咂基因敲除的小鼠进行缺血预处理，无明显的肝保 血预处理所动员的耵吓的剂量)后，在缺血再灌注早期(2h)和 晚期(24h)均可观察到缺血预处理的肝保护作用。所以，耵师 作为一个关键性的因子调节着缺血预处理的肝保护作用，促 进了缺血再灌注损伤时肝细胞的存活。因此，我们应用免疫 中文摘要 伤保护作用的机制，并为研究缺血预处理对肝脏缺血再灌注 损伤的保护作用的机制提供理论依据。 方法：采用50只雄性SD大鼠，制成肝脏原位缺血再灌注 模型，通过观察形态学变化，使用全自动生化仪法检测谷丙 转氨酶，谷草转氨酶水平，免疫组化法澳IJBcl．2蛋白，核因子 NF．r．B表达水平，以及使用TUNEL法检测肝细胞凋亡水平， 比较肿瘤坏死因子预处理与缺血预处理对大鼠肝脏缺血再 灌注损伤的保护作用。 结果 1血清ALT、AsT的水平 75．8_+46．6 转氨酶水平均较IR组明显降低(P0．01)，差异具有统计学意 水平降低，差异有统计学意义(P0．05)。 2免疫组化法NBcl--2水平 各组细胞指数分别为：S组：12．99--．3．21；IR组： 中文摘要 TPC组以及TPCS组之间差异均无统计学意义(P0．05)。 3免疫组化法测脬KB水平 各组细胞指数分别为：S组：10．15±4．42；IR组： 组以及TPCS组之间差异均无统计学意义(PO．05)。 4肝脏细胞凋亡指数 ，n肘EI祛测定各组肝组织的凋亡水平，记数500个细胞， 灿水平明显升高伊O．01)，具有统计学意义；口c组、TPC m水平降低(P0．05)，有统计学意义。 6Bcl．2蛋白含量与凋亡指数之间的相关性 因空白对照组(S组)仅解剖肝十二指肠韧带而不阻断 血流，未进行缺血再灌注，所以，没有受到促进凋亡的损伤， 极少发生凋亡。去处空白对照组，对其余各组肝组织Bd．2 蛋白细胞指数与凋亡指数的相关性分析，表明Bd．2蛋白含量 与凋亡指数呈明显负相关。O．_一0．902，P0．05) 中文摘要 7NF．KB含量与凋亡指数之间的相关性 因空白对照组(S组)仅解剖肝十二指肠韧带而不阻断 血流，未进行缺血再灌注，所以，没有受到促进凋亡的损伤， 极少发生凋亡。去处空白对照组，对其余各组肝组织NF-lCB 细胞指数与凋亡指数的相关性分析，表明NF．rd3含量与凋亡 指数呈明显负相关。(r0．877，P0．05) 8增大预处理使用的TNF．a量，不能提高保护的效果 (P0．05)，具有统计学意义；保护效果比．tPC组弱。 结论 1我们在本实验中比较了缺血预处理和TNF．a预处理对大鼠 肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。结果显示，缺血预处理组 组，凋亡指数也明显低于缺血再灌注组，提示TNF．a预处理 确实可以模拟缺血预处理对缺血再灌注肝脏的保护作用，且 效果明显。但增大TNF．a预处理使用的TNF．a量不能增加其 保护作用。甚至在某些组观察到，增大的使用TNF．a剂量会 影响到保护作用。 2Bcl