同种异体神经复体桥接修复兔坐骨神经缺损的实验观察.pdf

中文摘要 同种异体神经复合体桥接修复兔坐骨神经缺损的实 验观察 摘 要 目的；将体外培养提纯的胎兔雪旺细胞种植到经化学处 理的脱细胞同种异体神经段中制成桥接复合体。然后将桥接 复合体移植到兔缺损的坐骨神经上，观察坐骨神经的再生及 功能恢复情况。从而证实桥接复合体既能为再生神经提供良 好的支架作用，又能够诱导和促进神经轴突和髓鞘的再生，’ 为临床修复神经缺损提供实验基础理论。 方法：1、胎兔雪旺细胞的培养：取怀孕28天的新西兰 白兔．．处死后迅速取胎兔。在手术显微镜下无菌条件下取胎 兔双侧坐骨神经，尽可能剥除神经外膜及束膜后将其剪碎。 和提纯雪旺细胞，并辅以神经生长因子(NGF)促进雪旺细 胞的生长。倒置相差显微镜下观察雪旺细胞的生长情况，并 接种进行传代，收集生长良好的第二代细胞计数并应用 S．100蛋白免疫组化鉴定。2、去细胞神经桥接体的制备：取 成年健康新西兰白兔，自梨状肌下缘以远切取双侧坐骨神 经，作为同种异体神经的来源。手术显微镜下去除其表面的 脂肪组织及部分神经外膜，并将其分为每段3厘米。首先4。c 蒸馏水中静置6h，再将神经段放入3％Tritonx一100(聚氧 乙烯辛烷基酚)中静置12h，然后置蒸馏水中震荡漂洗6h。如 此反复，Tritonx一100共作用时间为96h。对萃取的神经段 行石蜡切片HE染色及扫描电镜观察去细胞的情况。3、种植 中定摘鼹 雪旺缁胞的阀种异体神经复合体修复兔坐骨神经缺攒的实 的微量注射器注入神经段内，然詹将神经段迅速移植到兔缺 损的一侧坐骨神经(实验组)，对照组移植未滚入雪贬纲嗥 的去细胞同种异体神经，术后4闵，8周，12周大体观察兔 鲍足部溃疡形成及愈合馕凝。逯过腿电豳、光镜、电镜等方 法检测坐骨神经轴突及髓鞘的再生及功能恢复情况，并进行 统计孛分辑。 结果：l、雪旺细胞的培养与观察：经传代的雪旺细胞 恻置樱差显微镜下计数并瑷察缨爨形态；雪旺纲戆鳇浓度己 达到1×10S／ml，其典型形态星梭形，有突起，多为双极，偶 殛三令缨憝突起。脆核甓显，呈舞隧形。缀蔻星壤对端、瘸 并肩、漩涡状戚栅栏样排列生长。内仍叮见少量成纤维细胞， 缒俸较雪疆缨胞大，扁平状矫形不烧则，突起瓣焉多，核仁 明显，有2到3个核仁，颜色较霉旺细胞浅。2、去细胞神 经桥接体的观察：一般往状观察；神经萃取过獠中可觅两端 及周围有絮状物析出，萃取后神经星淡乳白色，无光泽，其 外径及长度较新鲜神经稍减小，柔软，有韧性。HE染色观 察：神经纤维结构消失，红染的神经内膜是波浪状纵形排列， 形成蓍柱状空隙。扫描电镜观察：神经内的轴突、髓鞘已被 宠全去除，可见由胶原纤维构成酶立体管状结构，部分管腔 不规则。胶原纤维仍维持原有的位置、形态及结构特，征，管 内芳可见膜样结构，为雪旺细胞蒸底膜。3、葶孛檀雪隧缨胞 的同种异体神经复合体修复兔坐骨神经缺损的实验观察：术 矮4周、8震、12躅涎组动物手拳区局帮均未出现甥受的排 斥反应，实验组足部溃疡愈合情况、神经纤维数目、髓鞘及 中文摘要 再生神经的超微结构均优于对照组。神经传导速度(NCV) 于术后4周时，两组均未见明显的神经传导，术后8周、12 周实砬组优于对照组。 结论：采用双酶消化法和双差速贴壁法培养和提纯雪旺 细胞并辅以神经生长因子(NGF)可获取足够浓度的雪旺细 胞。用3％Triton x一100作用96小时后可去除周围神经中的 细胞和髓鞘而保留完整的基底膜管和纤维支架结构。种植雪 旺细胞的去细胞同种异体神经复合体不仅能够为再生神经 提供良好的支架作用，又能够诱导和促进神经轴突和髓鞘的 再生，对坐骨神经缺损后的再生有更加有效的促进作用。 X-- 关键词：去细胞同种异体神经；雪旺细胞；Triton 100；坐骨神经；组织工程 麓文摘薅 譬he of Schwann