实时荧光定量r-pcr检测il-2rα mrna方法学建立及在强直性脊柱炎中的应用.pdfVIP

汪辩萎学院硕士研究生毕业(学位)强支 Q L一2R 实时荧光定量RT-PCR检测ImRNA方法学建立 及在强直性脊柱炎中的应用 中文摘要 目的：1．构建自细胞俞素一2受体a(intcrlculdn-2 fluorescence reverse 光定量逆转录聚合酶链反应(real．time quantitative chain transcription reaetion,real-time polymerase FQ-RT-PCR)标准。2．创建和优化 IL-2Rn mRNA实时荧光定量检测体系。3．定量检测强直性脊柱炎患者外周血单 个核细胞IL-2RatuRNA表达并进行相关分析。 方法：从强直性脊柱炎(ankylosingspondylitis，AS)患者外周血中提取单个核细 胞中的总RNA，根据GenBank提供的人IL．2Ra mRNA序列设计一对引物和一条 载体连接，重组质粒转化感受态细胞进行克隆，经测序分析确定为特异性目的 特异性、线性、精密度和探针稳定性等。定量测定I-ILA-B27阳性组与阴性组的 强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞IL-2Ra mRNA并进一步探讨与血浆可溶 性白细胞介素一2受体(solubleinterleukin-2 receptor,sIL-2R)的相互关系。 结果：1．成功建立了线性范围为每毫升7～107个细胞f36～1．37X 10scopies／m1) Ib2Ra 的FQ-RT-PCR mR．NA技术。低浓度和高浓度批内Cv6．6％、9．9％；批间 CV9．9％、11．2％。2．扩增产物克隆的测序结果经BLAsT比较分析证实为正常人 IL·2Ra mRNA。3．对各30例HLAm27阳性活动组强直性脊柱炎测定表明：与健 mRNA和 康对照组和HLA．B27阴性非活动组比较，HLA-B27阳性活动组Ⅲ．2Ra sIL-2R有明显增加(p，o．01)。IL-2RatuRN鲥炎症活动评价的灵敏度为96．7％。 结论：l。成功的构建了IL-2RamRNA实时荧光定量逆转录聚合酶链反应体系， 该方法具有灵敏、特异、结果重复性好等优点。2．与sIL-2R比较，测定m-2Rn mRNAE能反映强直性脊柱炎患者的免疫状态，可能为免疫药物的疗效评价和 药物筛选提供基因表达水平上的信息。 关键词：实时荧光定量逆转录聚合酶链反应；脊柱炎：强直性； 自细／15彳t素．2受体俚：信使核糖核酸 4 温州医擘虎硕士研究生毕业(学位)论文 ofInterleukine-2 QuantitativeAnalysis in Blood PeripheralofAnk37losingSondylitis Expresstion Fluorescence Reverse Transcription by Quantitative ChainReactionandClinical Polyme