川芎嗪对氧诱导视网膜血管增殖的作用研究.pdf

川芎嗪对氧诱导的视网膜血管增殖的作用研究 川芎嗪对氧诱导的视网膜血管增殖的作用研究 专业：眼科学 硕士生：谢素贞 导师：梁小玲副教授 中文摘要 血管增殖性视网膜病变是一类以视网膜新生血管形成为特征的常见致盲眼 病，该病最终因视网膜新生血管增殖、出血和牵引性视网膜脱离而导致不可逆性 失明。FI前的研究认为，在该类疾病中视网膜新生血管的生成是由于各种原因导 致机体内新生血管生t成的刺激因子和抑制因子之间平衡失调造成的。血管内皮生 长因子(VEGF)作为最重要的新生血管生成刺激因子，在其中发挥了重要的作 用。目前针对该类疾病的治疗主要是针对视刚膜新生血管的治疗，临床、卜手术和 激光的治疗效果欠佳，而且尚无特异的药物治疗。因此寻找一种针对视网膜新生 血管治疗的药物尤显重要。 由于中药川芎嗪具有扩张微血管、改善微循环障碍、抗氧化损伤等作用，目 前已经被广泛应用于治疗心血管疾病和再灌注损伤等。近年来一系列研究表明』II 血管的，}i成中起着重要的作用。因此我们设想川芎嗪对血管增殖性视网膜病变有 一定的作用。本课题即根据这个设想从体外和体内研究川芎嗪对血管增殖性视网 膜病变的作用及其作用机制。 第一部分川芎嗪对培养的人视网膜血管内皮细胞的作用研究 日的：观察正常及缺氧条件下川芎嚷对体外培养的人视网膜血管内皮细胞增 殖的影响及其作用机制。 方法：原代培养人视网膜[f皿管内皮细胞并进行鉴定，取第2—4代的细胞进行 实验。分别侄lI二常和缺氰条件下培养细胞，用氯化钴模拟细胞化学缺氧。每个培 川I芎嗪对氧诱导的视网膜血管增殖的作用研究 天和第6天分别用四甲基偶氨唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖情况。同时用 mRNA的表达。 流式细胞仪检测细胞凋亡情况以及用RT—PCR检测细胞VEGF 结果：在正常和缺氧培养条件下，加入川芎嗪后细胞的增殖均比对照组明显 减少，且高浓度川芎嗪对细胞增殖的抑制作用比低浓度川芎嗪明显。正常培养条 组2为(52．8+2，9m。缺氧培养条件下，流式细胞仪检测细胞凋亡率如下：对照组 24小时细胞VEGF mRNA与对 和49．06％(P=0．0002)。而正常培养条件下加入川芎嗪干预后VEGF 照组比较无统计学差异。 结论：川芎嗪具有抑制正常和缺氧条件卜培养的人视网膜血管内皮细胞增殖 的作用。其对正常的人视网膜血管内皮细胞的抑制作用可能是通过促进细胞凋亡 来实现的，而对缺氧细胞的抑制作用则可能是通过促进细胞凋亡和抑制细胞 VEGF的表达来实现的。 第二部分川芎嗪腹腔注射在氧诱导的视网膜血管增殖模型 小鼠视网膜内含量研究 目的：观察氧诱导的视网膜m管增殖模型小鼠腹腔注射』11芎嗪后进入小鼠视 网膜JII芎嗪的含量。 方法：将鼠龄为7天(Postnatal 体积分数为75％的氧箱中连续饲养5天，在P12将其放回『F常大气环境中继续饲 取出视网膜，采用反向高效液相色谱法测定进入视网膜的川芎嗪含量。 结果：OIR4、鼠腹腔注射』Il芎嗪30分钟后视网膜组织中JI『芎嗪含量为 79_+6．1 (38 3)ug／mg。 川芎嗪对氧诱导的视网膜血管增殖的作用研究 结论：川芎嗪腹腔注射后能通过血视网膜屏障进．X．OIRtJ、鼠视网膜组织，为 川芎嗪全身给药治疗小鼠视网膜血管增殖奠定了实验基础。 第三部分川芎嗪对氧诱导的小鼠视网膜血管增殖的作用研究 目的：观察川芎嗪腹腔注射对氧诱导小鼠视网膜血管增殖的作用及其机制研 究。 方法：建立氧涛导的小鼠视网膜血管增殖模型，方法同上。在P12一P16每天 射液，以腹腔注射0．05ml生理盐水(第3组)作对照。P17做荧光素灌注后的视 simplicifolia