大鼠拟表皮模型在巯基乙酸皮肤毒作用评价中应用的研究.pdf

渗沥于御另动，多、郭; 中文摘要 第一部分 导电聚毗咯膜大鼠角阮细胞原代培养技术的建立和细胞生 物学特性分析 (导电聚毗咯膜作为一种新型的高分子聚合材料，具有促进细胞体 外生长的作用J3z研究重点探讨了将导电聚毗咯膜与无血清培养基相 甲口 结合用于大鼠角阮细胞原代培养的技术方法，少析了导电聚砒咯膜应 用于大鼠角阮细胞培养时细胞生物学特性的变化，在此基础上建立了 导电聚毗咯膜一无血清培养基大鼠角阮细胞原代培养的方法，为皮肤毒 翌I研究和大鼠拟表皮模型的建立提供了技术支撑气厂勺厂 / 了 ‘ 一 、导电聚毗咯膜用于大鼠角阮细胞原代培养的实验研究 、 L 导电聚毗咯膜制备条件的正交试验 应用3因素3水平的正交设计，对制备导电聚毗咯膜的主要实验 因素水平进行了筛选。结果表明，毗咯浓度为0.05M,聚合时间500 秒、电流为10毫安条件下制备的聚毗咯膜促大鼠角阮细胞生长最优。 2.导电聚毗咯膜大鼠角阮细胞原代培养技术实验条件的研究 通过实验对比的方法，建立了导电聚毗咯膜一无血清培养基大鼠角 阮细胞培养方法。最佳实验条件为:使用DKSFM 无血清培养基，角 肮细胞按照2XlO/ml密度种植，使用导电聚毗咯膜 (按照砒咯浓度 0.05M、聚合时间500s、电流 10mA条件制备)通电刺激，恒电压l00mv, 每48小时刺激一次，每次2小时。在此条件下所获得的大鼠角阮细胞 保持了未分化的特性，其数量较传统培养方法增加50%左右。 二、应用导电聚毗咯膜技术培养的大鼠角阮细胞生物学特性分析 使用导电聚毗咯膜技术进行大鼠角肮细胞原代增殖培养，然后进 行传代实验。将传代4代的细胞与传统培养方法所获角阮细胞进行细 胞形态学、细胞超微结构、细胞膜流动性、细胞间通讯连接功能比较。 结果表明:光镜下两种细胞的形状、大小、核仁大小无明显差别。电 镜下两种细胞的超微结构也无明显差别。传代细胞荧光偏振度P值和 膜脂区微粘度几以及间隙连接通讯功能 (用荧光传递层数表示)同正 常培养的角阮细胞无显著差异。 综上所述，可以得出如下初步结论: 1.导电聚毗咯膜与DKSFM无血清培养基联合使用于大鼠角阮细胞的 _ 雄替睦-袅一-z. 原代培养，可使细胞保持未分化特性，细胞增殖加快50%左右。 2.聚毗咯膜的最佳制备条件为毗咯浓度0.05M、聚合时间500s、电流 1OmAo 3.基于导电聚毗咯膜与无血清培养基培养的大鼠角阮细胞种植密度 为2XlO/ml，较传统培养方法降低了1倍。 4.基于导电聚毗咯膜与无血清培养基培养的大鼠角阮细胞可传4代， 通过细胞形态学，超微结构，细胞膜流动性以及细胞间通讯连接功能 的比较分析，其细胞生物学特性未见有异常改变。)/了一 第二部分 大鼠拟表皮模型的实验研究 钵研究 用导电聚毗咯膜技术获取较大数量的大鼠皮肤角阮细胞 和成纤维细胞，以I型胶原蛋白与大鼠皮肤成纤维细胞培养形成凝胶 拟真皮，将大鼠角阮细胞种植于凝胶拟真皮之上，经过浸没式培养和 气液面培养，建立了具有类似表皮结构的大鼠拟表皮模型。 令、胶原蛋0-成纤维细胞凝胶拟真皮模型的实验研究 将I型胶原蛋白醋酸溶液 (浓度为5mglml)与大鼠皮肤成纤维细 胞相混合，加入含 10%胎牛血清的完全培养基培养，大约2星期后胶 原纤维被成纤维细胞压缩，重新排列，形成类真皮的组织结构。光镜、 扫描电镜下该拟真皮模型同大鼠真皮具有类似的结构。 二、大鼠拟表皮模型的实验研究