抗氧化性营养素紫外线的DNA的损伤的保护作用的研究.pdfVIP

中 文摘 要 目1 的 臭氧减少及臭氧层破坏已经成为重大的环境问题，将导致到 达地面的紫外线，特别是B段紫外线的增加。长期过量的紫外线 暴露将增加对眼睛、免疫系统以及皮肤的损伤。 紫外线是一个完全的致癌因子，它即能引发突变，又有促发的 作用。随着研究的进展，紫外线致癌模型有了进一步的发展，以皮 肤癌为例，紫外线直接或间接地通过活性氧产生DNA损伤，进而 引发皮肤癌。紫外线产生的活性氧自由基(以UVA为主)作用于 DNA，可形成氧化性碱基修饰物8一OH—dG和DNA链断裂。B 段紫外线的直接作用部位是DNA，以产生环丁烷嘧啶二聚体 (CPD)和6—4光产物为主；所形成的DNA损伤分别在不同的系 统内被修复。在修复过程中，也可在DNA损伤部位附近形成酶性 的链断裂，以切除损伤部位。当损伤不能修复时，二聚体处可产生 DNA链断裂的生物学意义还不清。突变的碱基引起癌基因的激 活和抑癌基因的失活时，则易于引发癌变。因此，DNA损伤是引 发皮肤癌的基础。而活性氧自由基在其中的作用愈加为人们所重 视，除直接作用于碱基外，其引起的膜的脂质过氧化反应很可能是 形成氧化性DNA损伤的又一机理。 单细胞凝胶电泳技术(又称彗星实验)是一种快速而有效的检 测DNA损伤的方法。在碱性电泳条件下，可以检测到DNA的单 链断裂(SSB)和其他损伤所产生的碱易变性部位。本实验通过应 用单细胞碱性凝胶电泳技术检验几种抗氧化剂(V￡、Vc、BHT和 烟酰胺)对人外周血淋巴细胞DNA的作用以及对紫外线造成的 淋巴细胞DNA损伤效应的保护性作用研究，进一步证实活性氧 ·1‘ 及氧自由基在萦外线的DNA损伤中的作用，并为深入探讨具有 抗氧化性的营养素在綮外线的DNA损伤中的保护作用提供一些 佐证，为开发研制更有效的添加剂及皮肤防护用品、预防皮肤损伤 及皮肤癌的发生提供科学的依据。 方 法 1+淋巴细胞的分离 采取不吸烟健康人外周血18份(男女各半，年龄25—45岁)， 每份血20ml。分别用于紫外线量效关系的观察、抗氧化剂量效关 系和保护作用的观察以及烟酰胺作用的进一步观察。取血后肝索 抗凝，常规分离淋巴继胞，并将细胞数调整至3×105／m!，4℃冰箱 存放备耀。 2．琼脂糖凝胶玻片制备 将载玻片浸浩一薄层0。8％琼脂糖(PBS滚配制，60C融化) 在冰盘上凝固，用于促使第二堪和第三层的吸附。在第一层璩膜糖 上，加入10ut经处理或未经处理的淋巴细胞悬液(约30000个细 胞悬液，用盖玻片使其展开，放置在冰盘上5—10分钟，使其凝固。 揭去盖玻片，依据处理因素的不同，不经或经过紫外线照射后，迅 速加上第三层0．5％低熔点琼脂糖75ul，压平后移去盖玻片。 3．实验处臻因素 1)紫外线照射餐效关系的确定：将铺有淋巴细胞猖低熔点 璩脂糕混合液的载玻片分别照射1、3、5、个最小红斑剂量，时间分 别为5、】5、25分钟，未照射缉为对照组(0MED)。每个照射剂量缌 检测6个栉摄。 2)抗氧化剂效应关系的测定：将细胞憋液加入不同抗氧化 剂嚣于371C培养30分钟后，与低熔点琼脂糖按1：7．5比例混匀， ·9‘ 取85ul铺于第一层上，然后铺加第三层胶。抗氧化剂的种类及作 mM，50 mM，25 用于淋巴细胞的终浓度分别为：BHT(12．5 相同。每个浓度均为六个样品。 3)抗氧化剂保护作闵的测定：将2)中黪制备好的胶板爆露 予3MED的紫外线下。 4)烟酰胺浓度效应关系及保护作用的测定：在2)、3)的基 uM，100 uM，1 础上，增加烟酰胺的浓度至1uM，20 uM，400 mM，3．125mM，6．25mM，12．5InM。 4．淋巴细胞DNA单链