砷对星形胶质细的毒性作用及其机制研究.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………·1 英文论著摘要……………………………………………………………………·4 二、英文缩略语………………………………………………………………………·8 三、论文 前言…………………………………………………………………………………………………………．9日Ⅱ舌…………………………………………………………………………………………………………· 材料与方法………………………………………………………………………10 实验结果…………………………………………………………………………·14 讨论………………………………………………………………………………………………………··20 结论………………………………………………………………………………………………………一21 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………22 五、参考文献…………………………………………………………………………23 六、附录 综j查………………………………………………………………………………………………………··25 在学期间科研成绩………………………………………………………………34 致{射………………………………………………………………………………………………………”35 个人简介…………………………………………………………………………36 ·中文论著摘要· 砷对星形胶质细胞的毒性作用及其机制研究 刖 再 环境砷污染是一个严重的公共卫生问题，长期经口摄取无机砷化物可造成全 身多系统的损伤，包括神经系统、心血管系统以及典型的皮肤损伤。目前，我国 的高砷暴露人口达300万，是世界上受砷中毒危害最严重的国家之一。近年来， 砷对中枢神经系统的毒性作用引起了人们的广泛关注。儿童是环境砷暴露的易感 人群，国内外流行病学调查均发现长期砷暴露可影响儿童的智力发育。动物实验 研究也表明，砷具有一定的智力发育毒性。但长期砷暴露对中枢神经系统损伤的 机制如何，尚无明确的结论。 星形胶质细胞(Astrocyte，AC)是脑组织中数量最多的细胞群体，其功能不 仅仅是支持、保护和营养神经元，它还参与突触间隙神经递质的清除与代谢、促 进突触形成与维护突触的正常功能。AC还是血脑屏障的结构基础，故在血管和神 经元之间形成了一个屏障，将神经元与外界环境隔离。因此，砷中毒时血液中的 砷透过毛细血管后应首先进入AC。此外，AC内具有谷氨酰胺合成酶(Glutamine (Glutamate／Aspartatetransporter)和GLT一1(Glutamate 不仅能快速清除突触问隙的Glu，而且能对摄入的Glu进行代谢转化，形成谷氨 酰胺(Glutamine，GIn)。 综上所述，AC很可能是血液中无机砷进入脑组织后初始损伤的靶细胞。本研 究以体外原代培养Wistar大鼠的AC为试验对象，探讨砷对AC的毒性作用及其 机制，为阐明砷对中枢神经系统损伤的机制提供实验参考数据。 材料与方法 l、星形胶质细胞的分离、培养、纯化与鉴定 取出生1．3天Wistar大鼠的仔鼠，消毒后，断头取大脑皮质，剪碎、胰酶消 化结合机械吹打使细胞分散，筛网过滤，将细胞悬液接种在玻璃培养瓶中，培养 30min后进行差速粘附处理去除成纤维细胞，将未粘附的细胞悬液接种在塑料培 养瓶中，培养9．12d。待细胞基本长满单层，进行细胞传代，GFAP免疫组化染色 鉴定培养细胞的纯度。 2、染毒与分组 以亚砷酸钠为染毒物。共分为5组，培养液中含砷浓度分别为0、5、10、20 或301amol／L，培养24h后检测如下指标。 3、检测指标与方法 (1)MTT法检测细胞活力。 (2)倒置显微镜观察细胞形态及生长状态，并采集图像。 (3)流式细胞仪法测定星形胶质细胞线粒体膜电位。 (4)荧光显微镜观察细胞线粒体膜电位，并采集图像。 (5)采用Western Blotting法测定GLAST、GLT-1及GS蛋白的表达。 4、统计分析 检测数据输入计算机，用SPSSl3．0进行数据的统计分析与处理。用单因素方 Newman．Kenls，S