肺癌组织NF-BP65和HSP70的表达及其关系的研究.pdfVIP

郑州大学2003年坝卜论文 肺痛组织NF．K BP65和HSP70的表达及其关系的谚堕 肺癌组织NF-KBP65和HSP70的表达 及其关系的研究 研究生 夏向群 导师 吴逸明 郑州大学公共卫生学院劳动卫生职业病 与毒理学教研室 郑州450052 中文摘要 肺癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均呈上升趋 势，上升幅度在我国居于各肿瘤之首。它的发生是多基因、多阶段、多因素的过 程，同时也是细胞凋亡失调、细胞增殖失控的结果。有多种基因参与了肺癌的发 生过程，它们相互调节、相互作用，以网络化的形式调控着肺癌的发生。 NF—r．B(Nuclearthanscdptionfactor-’cB)是一种关键性的核转录因子，广泛存在 于真核生物的胞质里，是一个由复杂的多肽亚单位组成的蛋白质家族，已确定的成 KB B 员有五个，即RelA(P65)、RelB、C-Rel、NF1(P50／P105)、NF—K2(P52／P100)。 NF—rB可以通过抑制细胞凋亡、促进细胞增殖和直接调控癌基因表达等方式参与 肿瘤的发生，还与肿瘤的化疗敏感性等有密切关系。NF．v．BP65是NF—KB家族的 重要成员之一。研究发现NF一1cBP65在大肠癌、肝癌、骨肉瘤、胰腺癌等多种肿 瘤中表达增高，而它在肺癌中的作用及表达情况如何，尚未见到报道。 shock HSP70(Heatprotein70)是人类发生应激反应时生成的主要的热休克蛋 白，其基因表达的调节主要发生在转录水平。近年来研究发现，HSP70参与了细 胞凋亡和肿瘤的发生过程，还可结合肿瘤细胞表面的抗原多肽，参与肿瘤的免疫。 已发现HSP70在胰腺癌、喉癌、胃癌等肿瘤组织中有高表达。 目前许多研究表明在应激、缺血再灌注损伤和炎症等的发生过程中NF—rd3P65 和HSP70之间有相互调控的关系。但是，在肺癌发生过程中二者之间有无调控关 系以及二者的作用如何，尚未见到报道。本研究采用Western blot方法对肺癌组 郑州人学2003年顾一l论文 肺癌组织NF．KBP65和HSP70的表达及其关系的研究 二者在肺癌不同病理分型和临床分期的表达情况以及二者之间的关系作了初步 的分析。 方法： 1．标本收集：本研究共收集肺癌组织(C组)和配对的正常组织(N组)各43 例。其中有鳞癌18例，腺癌16例，腺鳞癌5例，大细胞肺癌1例，小细胞肺癌 3例。收集的新鲜标本立即放入液氮中，后转入一80。C冰箱保存。 2．标本组织蛋白的提取：快速剪取适量标本，0。CPBS充分洗涤，在冰预冷的悬 浮缓冲液中匀浆后尽快加入等体积的2×SDS凝胶加样缓冲液，然后将样品置于 上清液转移于另一Eppendorf管中，弃去沉淀物。所得上清液即为蛋白质提取物， 一20。C保存。用紫外可见分光光度仪检测上清液中蛋白质提取物的OD值，计算使 用Western blot免疫印迹法检测靶蛋白所需要的样品量。 3．SDS—PAGE分离蛋白：应用12％的十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-P：AGE)将组织蛋白进行分离。 4．Westernblot：将凝胶上的蛋白转移到硝酸纤维素膜上，转移上蛋白的硝酸纤维 素膜经封闭液封闭后，分别与一抗、二抗杂交，最后用3，3’．二氨基联苯胺(DAB) 进行显色。 5．照相：应用Bio Tools软件分析各蛋白条带， ImagingSystem照相，并用Gene 将结果转换成数值资料，保存。 6．统计学处理：所获