穴位埋线治疗过性哮喘豚鼠模型的作用机制研究.pdfVIP

摘 要 研究目的： 本实验采用卵蛋白致敏法建立过敏性哮喘豚鼠模型，以过敏性哮喘豚鼠为研究 对象，观察穴位埋线对过敏性哮喘豚鼠的治疗效应及肺、支气管组织病理学变化， 运用HE染色和免疫组织化学方法，观察肺部组织炎症细胞及其细胞分类，分析穴位 深入探讨穴位埋线对过敏性哮喘的治疗效应及其作用机制，为穴位埋线防治过敏性 哮喘提供实验依据。 研究方法： 健康豚鼠40只，雌雄各半，体重约230—2809，将所有豚鼠于安静环境中适应 性喂养3日后，随机分为：空白组、模型组、穴位埋线组、地塞米松组，每组lO 只。采用卵蛋白腹腔注射致敏后呼吸道吸入激发法制备哮喘豚鼠模型。除开空白组 不作任何干预外，其余各组均进行过敏性哮喘豚鼠造模。第1天用10％的卵蛋白溶 液lml进行腹腔注射致敏，然后从第15天开始用1％的卵蛋白溶液进行雾化吸入 20min，每天1次，连续两周，直至各豚鼠出现呛咳，躁动，呼吸频率加速，幅度加 大，腹肌痉挛等症状则提示造模成功。空白组：不予任何处理，至第30天开始予蒸 馏水2ml／只灌胃。模型组：制备哮喘气道重建模型，使大鼠处于致敏状态14d。自 第15天起开始雾化吸入1％卵蛋白生理盐水溶液以激发哮喘，隔日1次，每次激发 时间为20 min。穴位埋线组：造模豚鼠发作后第二天进行穴位埋线，每次干预均在 雾化前30min进行。埋线穴位选取大杼、风门、肺俞，8号注射针头和2寸一次性 针灸针组成埋线针，注射针头垂直刺入穴位下深度0．5CIll，边退针边用针灸针将羊 肠线推入穴位中。7天1次，风门和肺俞穴位左右交替，治疗3次后处死豚鼠，取 材检验。地塞米松组：每次雾化前30min给予地塞米松O．5 mg／kg腹腔注射，其余 均同模型组。治疗结束后，处死豚鼠，行HE染色及免疫组织化学检测。所有数据均 以x±S表示，采用SPSS19。0统计软件分析数据，进行单因素方差分析，两组比 较方差齐性时采用LSD法，方差不齐时采用DunnettT3法，PO．05为差异有统计 学意义。 研究结果： 1．肺部组织方面，正常对照组豚鼠支气管上皮完整，无明显炎症反应，肺组织 亦正常。哮喘豚鼠支气管及血管周围可见大量炎性细胞浸润，以嗜酸性粒细胞、中 性粒细胞、淋巴细胞为主，肺问质亦可见到嗜酸性粒细胞浸润。粘膜下层增厚，粘 膜皱襞增多，管腔可见狭窄。穴位埋线组及地塞米松组豚鼠经过各自干预后，支气 管及肺问质的炎性细胞浸润明显减轻，粘膜下层增厚不明显。 2．炎症细胞方面，模型组、穴位埋线组、地塞米松组炎症细胞总数均多于正常 对照组，差异有统计学意义(PO．05)；与模型组比较，穴位埋线组和地塞米松组炎 症细胞总数均减少，差异有统计学意义(P0．05)，其中Eos为三种炎症细胞中最少 地塞米松组均能使Eos数目减少，差异有统计学意义(PO．05)。结果提示过敏性哮 喘个体肺组织中存在以Eos为主的炎症细胞浸润，而穴位埋线及地塞米松可明显缓 解这种状况。 3．细胞因子方面，模型组中IL-21蛋白和IL一21R蛋白的平均光密度值和阳性 面积率远高于正常组，差异有统计学意义(P0．001)。地塞米松组和穴位埋线组分 别与模型组比较，IL一21蛋白和IL一21R的平均光密度值和阳性面积率明显减少，差 异有统计学意义(PO．Oi)，且穴位埋线组与地塞米松组比较，差异有统计学意义 蛋白的表达，而穴位埋线在减少相关细胞因子表达方面不及地塞米松作用强。 4．黏附分子方面，模型组中ICAM-1和VCAM一1的平均光密度值和阳性面积率明 显高于正常组，差异有统计学意义(PO．001)。地塞米松组和穴位埋线组分别和模 型组比较，ICAM—l和VCAM一1的平均光密度值和阳性面积率均明显减少，差异有统 计学意义(PO．01)，且穴位埋线组与地塞米松组比较，差异有统计学意义(P 的表达，但穴位埋线在减少相关黏附分子方面不及地塞米松作用强。 研究结论： 1．过敏性哮喘会影响豚鼠的肺部组织，引起相关病理反应，出现炎性细胞浸润 以及支气管粘膜下层增厚，粘膜皱襞增多，管腔狭窄，而穴位埋线及地塞米松均能 缓解过敏性哮喘豚鼠肺部组织的病理表现。并且地塞米松及穴位埋线均能减少炎症 细胞在哮喘豚鼠肺部组织的浸润及肺部组织的改变，从而缓解过敏性哮喘对肺部组 织的造成的病理改变。 2．过敏性哮喘导致的炎性细胞浸润中，以嗜酸性粒细胞增多为主，穴位埋线及