亚慢性砷暴露对鼠脑组织线粒体sdha表达影响.pdf

亚慢性砷暴露对小鼠脑组织线粒体Sdha表达影响 硕士生姓名：洪 岩 指导教师：朴丰源教授 专业名称：劳动卫生与环境卫生学 摘 要 目的：研究亚慢性砷暴露对小鼠脑组织线粒体复合体IISdha的表达影响，为 探讨砷的神经毒性机制提供分子毒理学依据。 方法：SPF级小鼠50只，雌雄各半，体重26．3--30．9 g。按体重将小鼠随机 分为5组：l As203染毒组；牛磺酸抗 ppm三氧化二砷(As203)染毒组；4ppm 氧化干预组(4 A$203+150mg／L牛磺酸)和维生素C抗氧化干预组(4 ppm ppm As203+45mg／L维生素C)；蒸馏水对照组。动物自然饮水和饮食，室温18-25℃。 通过饮用含不同浓度As203蒸馏水的方式使小鼠暴露于砷。保护剂是以灌胃方式 投给，每星期2次。连续染毒60天，颈椎脱臼法处死小鼠。应用免疫组织化学8 一羟基脱氧鸟嘌呤(8-OH—dG)实验检测小鼠脑组织氧化性损伤。应用电镜技术 观察砷暴露小鼠脑组织线粒体的超微结构变化。应用基因芯片技术筛选染砷小鼠 脑组织线粒体呼吸链复合体差异表达的相关基因。用westernblot方法验证线粒体 复合体IISdha的蛋白表达。通过比色法观察砷对SDH的酶活性影响。 照组间的统计学差异，以PO．05表示统计学差异显著。 、结果：与对照组比较，4ppm染砷组小鼠脑组织出现明显的8．OH．dG表达，而 对照组未见8．OH．dG表达。电镜结果显示，对照组小鼠脑组织线粒体双层膜结构 完整，嵴清晰可见。染砷组小鼠脑组织线粒体双层膜结构完整，线粒体肿胀，部 分嵴消失或断裂，线粒体出现空泡变。基因芯片筛选结果显示：染砷组小鼠脑组 织线粒体呼吸链复合体差异表达的相关基因共11条，其中表达下调的基因10条， 分别为NADH--泛醌还原酶基因(Ndufabl，Ndufbl2，and Ndufb2)，琥珀酸．泛醌还 一泛醌还原酶基因(Ndufs4)。小鼠脑组织线粒体复合体IISdha的westemblot结果 显示：Sdha蛋白表达量随着染砷剂量的增加其蛋白表达量明显减少，尤其在4 ppm 染砷组最为明显。在干预组(牛磺酸和维生素C)，线粒体复合体IISdha蛋白表达 量比4 Sdha蛋白表达量随着染砷天数的增 ppm染砷组明显增多。线粒体复合体II 多而降低。染砷组小鼠脑组织SDH酶活性低于对照组，且随染砷浓度的增高而降 低，尤其4 干预组，小鼠脑组织线粒体SDH酶活性显著高于4 ppm染砷组但低于对照组，差 别有统计学意义(尸0．05)。 结论：线粒体是砷毒性作用的亚细胞器，线粒体复合体II可能是砷毒性作用 的靶部位，Sdha可能是砷毒性作用的靶点。牛磺酸和维生素C干预剂对砷诱导的 Sdha基因的毒性具有一定的干预作用。 关键词：三氧化二砷 神经毒性 线粒体琥珀酸脱氢酶亚单位A活性氧族 2 to decreased in Subchronic arsenic Sdha exposure expression thebrainofmice Master Can