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植物组织培养的培养基 无机营养成分：水及矿质元素（无机盐） 有机营养成分 ① 含N物质：包括维生素和氨基酸 ② 碳源：2%—5%的蔗糖 ③ 琼脂：起支持作用 ④ 相关激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素 PH值：5.0－6.0 光照：前期不要，后期必要，有助细胞生长分化 植物组织培养 培养容器的培养基要高压蒸汽灭菌 外植体消毒接种（根尖、茎、芽、嫩叶、种子、花粉等） 整个试验在超净工作台上进行，保持无菌！ 【实验 胡萝卜的组织培养讨论】 1.在组织培养实验中，为什么要强调所用器械的灭菌和实验人员的无菌操作？ 提示：植物组织培养中用到的培养基含有丰富的营养成分，有利于外植体的生长，然而各种杂菌同样也可以在上面迅速生长，所以植物组织培养过程中污染现象经常发生。培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和培养物争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会生成大量对培养物有害的物质，导致培养物迅速死亡。 造成培养基污染的因素有很多，一般包括：外植体带菌、培养瓶和各种器械灭菌不彻底、操作人员操作不规范等。所以在组织培养实验中用到的植物材料和各种器械都要进行彻底地灭菌，实验人员操作一定要规范，避免带入杂菌。 比较脱分化再分化： 2.在本实验中，切取胡萝卜块根时强调要切取含有形成层部分，原因是这部分容易诱导形成愈伤组织。请思考一下，胡萝卜的其他部分（如茎、叶），是否也能培养成小植株，你能用实验的方法进行验证吗？ 提示：胡萝卜的其他部分（如茎、叶、花）也能培养再生形成小植株，只是分化较大，诱导愈伤组织比较困难。 纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，形成原生质体。 原理：酶的专一性、高效性 （2）诱导原生质体融合 是关键环节 根据的原理是:细胞膜的流动性 方法:物理 离心、振动、电激 化学 聚乙二醇(PEG)作诱导剂 成功标志是: 杂种细胞产生了新的细胞壁 （3）组织培养 根据的原理是:细胞膜全能性 过程:脱分化 再分化 植物体细胞杂交技术流程重点理解以下内容： ① 流程图中为了简化，仅画了一个马铃薯的原生质体与一个番茄的原生质体之间的融合，可真正在实际操作过程中，是把许多马铃薯的原生质体和许多番茄的原生质体放在一起，让它们自由融合出现多种融合，必须从中筛选出所需的杂种细胞。 ② 由于不同种的细胞其细胞膜的特点不一样，如不作任何处理，把它们放在一起，让它们自然融合是不可能的，所以原生质体间的融合必须要人工诱导。 （3）组织培养得到杂种植物 克服远源杂交不亲和的障碍，培育出自然界中没有的、具有优良品质的新品种。 成果 动物细胞工程 动物细胞的培养过程 注意： 1、选材 2、胰蛋白酶 3、分散单个细胞 4、贴壁生长 5、接触抑制 6、原代培养、传代培养 7、培养液成分 有关概念: 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。初次培养称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 植物组织培养和动物细胞培养的比较 动物细胞融合 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 二、单克隆抗体 B淋巴细胞与抗体的关系： 单克隆抗体 如何大量生产单克隆抗体？ 利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 结合同位素的单抗 动物细胞工程小结 动物细胞培养：原理、营养、条件、过程、细胞生长特点、结果、应用 动物细胞融合：原理、诱导方法、过程、应用 单克隆抗体的制备：原理、过程、特点、应用 核移植与克隆动物：供体、受体、核移植方法、克隆动物的方法、克隆动物的遗传特性、应用 动、植物细胞工程的比较：植物组培技术与动物细胞培养技术、植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术 ⑵如何诱导融合？ 加入聚乙二醇（PEG） ⑴如何得到B淋巴细胞？ 3.制备单克隆抗体的过程 ⑶细胞两两融合后，有哪些类型？ B-B B-瘤(杂交瘤细胞) 瘤-瘤 ⑷如何筛选出杂交瘤细胞？