细胞工程细胞培养.解读.pptVIP

滤器 自动双重纯水蒸馏器 纯水仪 培养箱和培养瓶 CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％CO2 。 使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题： ①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。 ②保持培养箱内空气干净。定期消毒 （90 ℃ ，14 h)。 ③箱内火菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中以保持箱内湿度，避兔培养液蒸发。 CO2培养箱 培 养 板 培 养 瓶 培养基 天然培养基： 天然培养基有血清、组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）、水解乳白蛋白。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限，价格昂贵。 成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结 果的分析。 易发生支原体污染 合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基，如TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定。 成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 合成培养基 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。 血清中含有： ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子； ③激素； ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分 二、 细胞培养的基本方法 常规细胞培养法 原代培养 取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。 传代培养 细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分开接种到新的培养器皿中。 LOGO 动物细胞培养 一、 动物细胞培养的基本原理 细胞培养：模拟体内的生理环境，在适当的条件下，使活体组织细胞在体外环境存活、生长增殖，并维持其结构功能。 培养细胞的形态特点 贴壁型 悬浮型 贴壁型细胞： 必须贴附于支持物表面才能生长。 大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞 按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型 上皮细胞型 成纤维细胞型 游走细胞型 多型细胞型 上皮型细胞 细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜，生长时呈膜状移动，起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。 成纤维细胞型 胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状、火焰状、漩涡状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌细胞等等常呈本型状态。 游走细胞型 　　在支持物上呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。 多型细胞型 　　有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。 悬浮型细胞： 于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面，见于某些癌细胞和血液淋巴细胞。 形态多为圆形，圆球形 培养细胞的生长和增殖过程 所谓培养细胞生命期，指细胞在培养中持续增殖和生长的时间 细胞全部生存过程大致分为以下三个阶段： 原代培养期 传代期 衰退期 培养细胞生命期 原代培养期：　　也称初代培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1一4周。 初代培养细胞多呈二倍体核型；由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很好的实验对象。 传代期：　　 初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系。呈二倍体核型的细胞称二倍体细胞系。 一般情况下当传代30～50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。 衰退期：　　此期细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。 转化的标志之一是细胞可能获得永生性或恶性性。 培养细胞一代生存期 　　所谓细胞培养的“一代”一词，仅指从细胞接种到分离再培养时的一段时间，在细胞培养一代中，细胞能倍增3～6次。 细胞一代生存期，一般要经过以下三个阶段： 潜伏期（游离期，贴壁期） 对数生长期 停止期（平台期） 潜伏期：　　细胞接种培养后，先经过