Chapter蛋白质资料.pptVIP

蛋白质各自所特有的高级结构，是表现其物理性质和化学特性以及生物学功能的基础。当天然蛋白质受到某些物理因素和化学因素的影响，使其分子内部原有的高级构象发生变化时，蛋白质的理化性质和生物学功能都随之改变或丧失，但并未导致其一级结构的变化，这种现象称为变性作用（denaturation） 蛋白质的变性作用如果不过于剧烈，则是一种可逆过程，变性蛋白质通常在除去变性因素后，可缓慢地重新自发折叠成原来的构象，恢复原有的理化性质和生物活性，这种现象成为复性（renaturation）。 4.? 蛋白质的变性与复性 变性的因素： 如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等 。 蛋白质变性后，往往出现下列现象： ①生物活性丧失 ②硫水基团外露，分子结构伸展松散，易被蛋白酶水解。 ③溶解度降低、沉淀。 变性的实质： 次级键（有时包括二硫键）被破坏，天然构象解体。变性不涉及一级结构的破坏。 应用：变性灭菌、消毒；此外, 防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。 5. 蛋白质的紫外吸收 由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。 （三）蛋白质分离纯化 电泳 前处理 粗分离 细分离 生物组织 无细胞提取液 破碎、溶 解、差速离心 选择性沉淀法 亲和 层析 离子交换层析 精制后的蛋白质 凝胶 过滤 疏水 层析 吸附层析 1.透析及超滤法 * 透析(dialysis)：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。 * 超滤法：应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。 2. 盐析及丙酮沉淀 *使用丙酮沉淀时，必须在0～4℃低温下进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。 *盐析(salt precipitation)是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。 3. 电泳 蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术, 称为电泳(elctrophoresis) 。 根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。 (SDS) 4. 层析 层析(chromatography)分离蛋白质的原理： 待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的 。 蛋白质分离常用的层析方法 * 离子交换层析：利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。 * 凝胶过滤(gel filtration)又称分子筛层析：利用各蛋白质分子大小不同分离。 离子交换层析是以离子交换剂为固定相，根据物质的带电性质不同而进行分离的一种层析技术。 凝胶过滤层析是以具有网状结构的凝胶颗粒作为固定相，根据物质的分子大小进行分离的一种层析技术。 本章重点: 1.氨基酸的结构和性质 2.蛋白质的结构、性质、功能 3.蛋白质一级结构的测定 4.蛋白质的结构与功能的关系 5.氨基酸、蛋白质分离纯化的基本原理与方法 １．蛋白质多肽链主链构象的结构单元包括___、____、___等，维系蛋白质二级结构的主要作用力是_____键。２．三肽Val-Tyr-Ser的合适名字是___________。 ３．有一个肽用胰蛋白酶水解得：①N-Met-Glu-Leu-Lys-C ②N-Ser-Ala-Arg-N ③N-Gly-Tyr-C三组片段，用BrCN处理得：④N-Ser-Ala-Arg-Met-C ⑤N-Glu-Leu-Lys-Gly-Tyr-C两组片段，按肽谱重叠法推导出该九肽的序列应为 _______________。 ５．蛋白质变性后，不发生下列哪种改变（ ）A.生物活性丧失　B.易被降解 C.一级结构改变 D.空间结构改变 E.次级键断裂６．下列蛋白质通过凝胶过滤层析柱时，最先被洗脱的是（ ）A.牛胰岛素（分子量5700） B. 肌红蛋白（分子量16900） C.牛β乳球蛋白（分子量35000） D.马肝过氧化物酶（分子量247500）7. 有一蛋白