Chapter酶学资料.ppt

* 竞争性 生物碱麻醉—竞争性替代 生物碱—吗啡、海洛因、可卡因、尼古丁 吗 啡 海洛因 利用竞争性抑制是药物设计主要思路 磺胺类药 抗菌机理（与对氨基苯甲酸是结构类似物） —竞争性抑制细菌叶酸形成，进而抑制细菌繁殖 人通过食物中的叶酸直接补充，对人无毒害。 2.非竞争性抑制 Ki ’≈ Ki （1）V下降，发生抑制 （2）Km不变，酶与底物亲和力不受影响 （3）Vmax减小（一部分酶始终失活） 重金属 如Cu2+、Ag+、Hg2+等 （4）强弱取决于抑制剂的浓度 非竞争性（Non-competitive) 第六节 酶活力的测定 一、酶活力及其测定 酶活力就是酶催化反应的能力。 人的能力——能办多大的事 酶的活力——能催化多快的反应 通常以测出的酶促反应速度表示酶的活力 产物浓度变化曲线 提问：为什么反应速度会随时间减小？ 答案：1.[S]降低； 2.酶受到产物抑制 提问：用哪一个速度来表示该酶促反应的速度特征呢？ 反应初速度 Vo 反应初速度表示酶活力。 提问：仅用反应初速度大小对比酶活力行吗？ 答案：不行，还与酶的加入量及条件有关。 二、.活力单位(U)与比活力 U＝速度单位 例如 ： 每小时催化1克底物 每小时催化1ml某浓度溶液 每分钟催化1ug底物 酶产品质量评价中常使用比活力 单位质量酶产品中酶活力称比活力。 u/mg酶蛋白 u/ml酶蛋白 国际单位（IU）：在实验规定的条件下（25℃，最适pH、最适底物浓度时），1ul标本，以每分钟能催化1微摩尔底物的酶量为1个国际单位。 三、酶活性中心转换数 酶的转换数是指在〔E〕t 一定、 [S] [E]的条件下，当被底物饱和时，单位时间内每一活性中心或每分子酶所能转换的底物分子数。 四、酶活力的测定方法 1、终点法 2、动力学法 3、酶偶联法 4、电化学法 酶活力测定实例： 首先 确定反应条件 20℃、pH=7，底物浓度 6g/l（过量），加入2mg固体脂肪酶 第二 确定活力单位 如每小时催化1克底物 1u= 1g/h 第三 测算反应初速度 作产物甘油随时间增加的曲线，量出反应初速度值 ，换算为脂肪的消耗速度 如 8g/h 第四 换算活力 8g/h / 1g/h=8u 第五 计算比活 8u/2mg酶蛋白=4u/mg酶蛋白 脂肪 脂肪酶 甘油 + 脂肪酸 第七节 酶的多样性 一、核酶和蛋白质的自我剪接 二、调节酶 三、同工酶 四、多功能酶 五、人工酶 一、核酶和蛋白质的自我剪接 核酶种类：自催化核酶（自我剪切核酶、自我剪接核酶），分子间催化核酶 核酶发现的意义：生命起源研究 具有催化活性的酶性RNA称为核酶。 二、调节酶（都是寡聚酶） （一）、共价修饰酶 （二）、别构酶 （一）、共价修饰酶 体内某些酶可在其他酶的作用下，将酶的结构进行共价修饰，使酶的活性发生改变，这种调节称为共价修饰调节。 修饰酶：具有共价修饰调节的酶。 磷酸化、乙酰化、甲基化和腺苷化等修饰，其中通过磷酸化和脱磷酸化来调节酶的活性是最重要和最常见的。 酶的磷酸化和脱磷酸化特点： 1、被共价修饰的酶存在有（高）活性和无（低）活性两种形式，化学修饰的结果是由其中一种形式变成另一种形式。 2、 酶的磷酸化共价修饰可以多级联合进行，而呈逐级放大效应，这种现象又称瀑布效应。如肾上腺素对糖原分解的作用。 3、 磷酸化作用需要ATP，酶蛋白上的每个磷酸化位点在磷酸化时需要消耗一个ATP的高能磷酸键，但这比合成酶蛋白需要的ATP少得多，因而磷酸化是酶活性调节经济有效的方式。 （二）、 变构酶（allosteric enzyme） 又称别构酶 变构——蛋白质在实现生物功能时构象发生变化，活力改变的现象。 变构效应剂：变构激活剂、变构抑制剂 变构酶——具有变构现象的酶 活性部位（与底物结合） 调节部位（与变构剂结合） 别构酶的特点：1、多亚基 2、变构酶常常是代谢通路的开端，或处于代谢通路的分支点上。 别构激活剂 别构抑制剂 3、别构效应物一般是小分子 4、绝大多数别构酶所催化反应的初速度与底物浓度的关系，不遵循米－曼关系 5、别构酶的动力学曲线呈S形曲线。 6、别构酶具有协同效应 V= V[S] Km + [S] 当V=90％V 0.9Km=0.1[S] ［S］＝9Km 当V=10