核酸的化学及其生物合成资料.ppt

高度重复序列 拷贝数可达106以上.包括卫星DNA(satellite DNA)中的短序列或简单重复序列和高丰度SINE家族中的ALu序列,拷贝数可多达数百万份.卫星DNA又称随体DNA.若把基因组DNA切成小片断(约104bp),再用氯化铯(CSCL)进行密度梯度超速离心.原核生物只显示一条覆盖一定活力密度范围的宽带(主峰),而真核生物大部分DNA主峰之后,会出现小峰,(如图1-11)其DNA浮力密度与GC碱基的含有关.原核生物DNA中的GC含量均匀,因此只显示一个主峰,而真核生物DNA中GC含量在30%-50%,形成一个主峰, 另外还有些DNA片断中GC含量或高或低,从而又出现了小峰,这些小峰在主峰旁形似卫星分布而得名.卫星DNA不编码蛋白质和转录RNA.它在染色体上的位置可用原位杂交法进行鉴定.大多数卫星DNA是位于染色体的着丝粒和端粒处.在着丝粒区由1-几种数以千计的短序列串联而成.典型的卫星序列为5-10bp,而人的最少重复单位为171bp,该序列在人群中有高度多态性.人的端粒是由串联的TTAGGG重复序列组成,对染色体起保护作用,防止染色体重排,断裂等.其长度随细胞分裂不断进行而缩短,它决定着细胞的寿命, 称之为有丝分裂的生物钟.近年来随着人类基因组研究的不断进展,又发现了微卫星DNA,又称简单重复序列,一般由1-6bp为重复单位串联重复构成,是研究DNA多态性标记之一,按重复单位数的差异可分为2bp,4bp,5bp 及6-7bp,以2bp为常见,即(AC) 和 (TG)n 占10%.在 人类基因组中2bp(≥14)的重复序列就呈高度多态性,在基因组约占5%是呈串联重复散在分布,其拷贝数为10-60次,属散在分布的重复序列.限制性长度多态性(RFLP)分析,可用于基因连锁的遗传标记,广泛用于诊断 . 回文结构（反向重复序列） 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * （二）核酸的紫外吸收特性 在核酸分子中，由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键体系，因而具有独特的紫外线吸收光谱； 一般在260nm左右有最大吸收峰，可以作为核酸及其组份定性和定量测定的依据。 可以利用260nm紫外吸收测量DNA变性程度。在260nm波长，单链DNA的吸收要比双链DNA的吸收高12-40％，因为双链DNA中堆积的碱基对之间的相互作用降低了吸收。 纯DNA OD260/OD280=1.8 纯RNA OD260/OD280=2.0 对于纯核酸来说，1OD260相当于: 1. 50ug/mL dsDNA; 2. 40ug/mL ssDNA or RNA; 3. 20ug/mL 寡核苷酸; （三）核酸的变性、复性与分子杂交 变性： 概念：指稳定核酸双螺旋的次级键断裂，从而导致核酸的空间结构被破坏，变成单链的过程。核酸的一级结构(碱基顺序)保持不变。 变性因素： pH（11.3或5.0） 变性剂（脲、甲酰胺、甲醛） 低离子强度 加热 变性表征： 生物活性部分丧失、粘度下降、浮力密度升高、紫外吸收增加（增色效应） DNA的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。因此，通常将DNA紫外吸收的增加量达最大值的一半时的温度称为熔解温度（也叫融解温度、解链温度），用Tm表示。 一般DNA的Tm值在70-85?C之间。DNA的Tm值与分子中的G和C的含量有关。 G和C的含量高，Tm值高。因而测定Tm值，可反映DNA分子中G, C含量，可通过经验公式计算：（G+C)%=(Tm-69.3)X2.44 2. 热变性和Tm 3. 核酸的复性 变性核酸的互补链在适当的条件下，重新缔合成为双螺旋结构的过程称为复性。 DNA复性后，一系列性质将得到恢复，但是生物活性一般只能得到部分的恢复，具有减色效应。 将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。变性的DNA缓慢冷却时可复性，因此又称为“退火”。 退火温度＝Tm－25℃ 复性影响因素 片段浓度/片段大小/片段复杂性（重复序列数目）/ 溶液离子强度 复性的速度服从二级反应动力学，即重结合的速度与两条反应单链的浓度成正比：-dc/dt=kc2 ，则c0t1/2=1/k。（c0t1/2为复性反应进行到一半时的c0t值。