第一章 色谱分析法 仪器分析教案.doc

第二章 色谱分析法 第一节 色谱分析法及其分类 1.1 什么是色谱法 借助于在两相间分配原理而使混合物中各组分分离的技术，称为色谱分离技术或色谱法。又称色层法、层析法。 固定相：在色谱分离中固定不动，对样品产生保留的一相。 流动相：带动样品向前移动的另一相，与固定相处于平衡状态。 实质：分离 目的：定性分析或定量分析 1.2、色谱法是如何起源的？ 1906年由俄国植物学家米哈伊尔·茨维特创立。 植物色素分离，见图示。 1.3、色谱法的发展 现在：一种重要的分离、分析技术 分离混合物中的各组分并加以分析 固定相——除了固体，还可以是液体 流动相——液体或气体 色谱柱——各种材质和尺寸 被分离组分——不再仅局限于有色物质 1.4、色谱法分类 1.4.1根据流动相的状态将色谱法分成四大类。： 基本类型色谱法的分离机制----结论 四种色谱的分离机制各不相同，分别形成：吸附平衡、分配平衡、离子交换平衡和渗透平衡。 K分别为吸附系数，狭义分配系数，选择性系数和渗透系数。 除了凝胶色谱法中的K仅与待测分子大小尺寸、凝胶孔径大小有关外，其他三种K值都受组分的性质、流动相的性质、固定相的性质以及柱温的影响。 第二节 色谱图及相关术语 2.1.1定义： 检测色谱分离后组分的响应信号对时间作图得到的曲线称为色谱图。 2.1.2 色谱图的作用（或色谱图信息的内容）： 1、根据色谱峰的位置（保留值）可以进行定性检测； 2、根据色谱峰的面积或峰高可以进行定量检测； 3、根据色谱峰的位置及其宽度，可以对色谱柱分离情况进行评价。 2.2 相关术语 1、基线： ⑴基线：当色谱柱中没有组分进入检测器时，在实验操作条件下，反映检测器系统噪声随时间变化的线称为基线。 稳定的基线是一条直线。 ⑵基线漂移:指基线随时间定向的缓慢变化。 ⑶基线噪声：指由各种因素所引起的基线起伏。 基线噪音是指空白时检测数据上下波动的大小，噪音太大会影响检测精度。 基线噪音又分为空池和带流动相时的噪音。一些进口仪器用空池噪音数值，这是只能代表仪器的电子噪音，不能代表检测噪音，因为做分析时是离不开流动相的。 并不是基线噪声小就说明仪器好,而是要看仪器的信噪比,信噪比大的仪器才是好的仪器. 在做定量时是可以通过数据处理里面的功能来算信噪比的。这时的噪声选择一般选在目标峰的前面，这只是一般原则。 2、保留值 保留值表示试样中各组分在色谱柱中的滞留时间的数值。 通常用时间或将组分带出色谱柱所需载气体积来表示。 被分离组分在色谱柱中的滞留时间，主要取决于它在两相间的分配过程，故保留值是由色谱过程中的热力学因素所控制的，在一定的固定相和操作条件下，任一物质都有一确定的保留值，这样就可用作定性参数。 (1) 保留时间（tR）：指被测组分从进样开始到柱后出现浓度最大值时所需要的时间。如色谱图中O’B所示。 (2)死 时 间（tM）：指不被固定相吸附或溶解的气体（如：空气、甲烷）从进样开始到柱后出现浓度最大值时所需要的时间。如色谱图中O’A’所示。死时间正比于色谱柱的空隙体积。 (3)调整保留时间（tR′）：指扣除死时间后的保留时间，即： tR′= tR—tM如色谱图中A’B所示。此参数可理解为，某组分由于溶解或吸附于固定相，比不溶解或不被吸附的组分在色谱柱中多滞留的时间。 (4)相对保留值（α或r21）：指某组分2的调整保留值与另一组分1的调整保留值之比。 这是一个在实际应用中非常重要的参数，因有如下优点： 只要柱温、固定相性质不变，即使柱径、柱长、填充情况及流动相流速有所变化， r21值仍保持不变，因此它是色谱定性分析的重要参数。 r21亦可用来表示固定相（色谱柱）的选择性。r21数值越大，相邻两组分的tR′相差越大，分离的越好，此数值等于1时，两组分不能被分离。 关于体积参数自学 3、区域宽度： 色谱峰区域宽度是色谱流出曲线中一个重要参数。 从色谱分离角度着眼，希望区域宽度越窄越好。 通常度量色谱峰区域宽度有两种方法： ⑴半峰宽度（Yh/2或Wh/2）：又称半宽度或区域宽度，即峰高一半处的宽度，如图中GH所示，由于它 易于测量，使用方便，所以常用它表示区域宽度。 ⑵峰底宽度（Y或W）：自色谱峰两侧的转折点所作的切线在基线上的截距，如图中IJ所示。 第三节 色谱法的基本理论 3.1色谱分离基本过程