载药磷酸钙纳米粒子的制备与体外评价.pdfVIP

  载药磷酸钙纳米粒子的制备与体外评价 1 1 刘妍 ，李建波，任杰 （同济大学材料与工程学院，上海市 201804 ） 摘 要：多西紫衫醇（DTX ）作为治疗乳腺癌的药物是提高病人的存活率的优先选择，然而其有明 显的毒副作用，病人在化疗过程中承受相当大的痛苦。在此研究中，我们采用新颖的合成方法，选 用磷酸钙作为载体，成功将药物包载在磷酸钙内。通过柠檬酸钠及 PEG 的表面改性，得到表面为 中性电势，粒径小于 100nm 的纳米粒子。载药磷酸钙纳米粒子与纯的药物相比，极大增加了乳腺癌 细胞 MCF7 的凋亡，而未载药的磷酸钙纳米粒子只有极小的细胞毒性。 关键词：磷酸钙；纳米粒子；紫衫醇；乳腺癌；PEG 改性 1.引言 多西紫杉醇（Docetaxel ）机理与Paclitaxel 相似，对很多肿瘤都有明显的疗效[1] 。 如前列腺癌、乳腺癌等。然而由于其极弱的水溶性和较高的毒性等副作用影响它在临 床上的使用。因此需要一种有效的载体将 DTX 输送到肿瘤部位，减少对正常细胞的副 [2,3] 作用，有效地杀死癌细胞 。 磷酸钙作为载体材料越来越得到人们的重视。磷酸钙是人体中骨骼与牙齿等的主 要成份，并且在血液中存在一定量的钙离子与磷酸根离子，因此磷酸钙纳米粒子 [4-6] 。CPSNP 是一种 （CPSNP ）具体极好的生物相容性，可作为药物等的理想载体材料 pH 敏感性纳米粒子，在体内血液循环环境中（pH 为 7.4 ），磷酸钙能保持很好的稳定 性，保护药物不释放出来。而在细胞的内吞溶酶体的后期，pH 降到4-5 ，在这一酸性 [7-8] 环境中，磷酸钙溶解，从而释放出抗癌药物 。 2. 实验原料与制备 2.1 磷酸钙载药纳米粒子的制备 本文采用反相微乳液法制备表面为柠檬酸改性的磷酸钙纳米粒子[9] 。将氯化钙和磷 酸钠水溶液分别加入到 14mL Igepal/环己烷中溶液中形成反相油包水微乳液，磁力搅拌 15min 使其分散均匀，形成透明溶液。将两个溶液混合，钙离子磷酸根离子在胶束内形     成沉淀，得到纳米磷酸钙，反应 30min，得到澄清透明溶液。随后滴加柠檬酸钠，反应 15 min。反应结束后，使用离心仪对反应后的产物清洗提纯，用纯的乙醇清洗，70/30 的乙醇/水溶液洗提以除去 Igepal、环己烷等有机溶剂，最后的产物分散在体积比为 70/30 的乙醇/水溶液中。 与空白粒子制备方法相似，在第一步形成反相胶束的同时，将药物加在磷酸钠溶 液一方，混合后共沉淀得到载药纳米粒子。 将最后得到的产物，加入 mPEG ，使用 EDAC 作为催化剂，50°C 下反应 12 个小时， 磁力搅拌，得到 PEG 表面改性的纳米粒子，反应产物过滤离心，最后纳米粒子分散在 70/30 乙醇/水溶液中。 2.2 磷酸钙纳米粒子的表征 使用 ZetaPlus 仪器（Brookhaven, 纽约，美国）测得载药纳米粒子表面电势（柠檬 酸表面改性及 PEG 表面改性纳米粒子）和粒子的粒径大小。样品使用 70 vol%乙醇稀 释后，在标准电极中室温下测定表面电势，粒径则是在室温下通过测定 90°的散射光下 测得。粒子的表面形貌则使用透射电镜（TEM ）来表征，将样品滴到铜网上，室温干 燥后进行观测拍照。 使用液相色谱－质谱联用仪测得纳米粒子中药物 Dtxl 的含量，样品使用20/80 乙 腈/0.1% 甲醇溶液来制备标准溶液。100ng/mL Paclitaxel 加入到所有的样品和标准溶液 中作为内标。 2.3 细胞毒性实验 载药纳米粒子的细胞毒性通过 MTS 试验来测定，选用乳腺癌细胞株 MCF-7 。 MCF7 细胞使用 RPMI 培养液+10%FBS+0.1%青霉素，在含 5% CO2 、3