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不同构成n-6/n-3多不饱和脂肪酸对乳腺癌细胞增殖和凋亡的作用研究 顾艳艳 马莉 熊金萍 陆琪红 第二军医大学附属长征医院营养科，上海200003 摘要：目的 探讨不同比例n-6/n-3多不饱和脂肪酸(polyunsaturatedfattyacid，PUFA)对乳腺癌细胞增 殖和凋亡的影响。方法 以雌激素受体阳性(positiveestrogenreceptor,ER+)的MCF-7和ER阴性(ER-) 的MDA-MB-231人乳腺癌细胞为实验对象，以单纯n-6PUFA、单纯n-3PUFA、1∶1n-6/n-3PUFA、 5∶1n-6/n-3PUFA、10∶1n-6/n-3PUFA处理细胞，采用细胞增殖曲线及四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法 观察细胞增殖能力及活性，TUNEL法检测细胞凋亡。结果 与对照组相比，单纯n-6PUFA、5∶1 n-6/n-3PUFA和10∶1n-6/n-3PUFA明显促进细胞增殖，其中n-6PUFA组细胞增殖速度最快，且各 组细胞无凋亡现象发生。而单纯n-3PUFA和1∶1n-6/n-3PUFA处理24h即可见细胞大量死亡，凋 亡率显著升高(P＜0.05)。结论 不同比例n-6/n-3PUFA对乳腺癌细胞具有不同影响，且与雌激素受体 表达情况无关，5∶1以上比率n-6/n-3PUFA均能显著促进细胞增殖，且此效应随n-6/n-3的比例 增高而增强;而单纯n-3PUFA和1∶1n-6/n-3PUFA能显著抑制细胞增殖、促进凋亡。 关键词 n-6/n-3PUFA;乳腺癌细胞；增殖;凋亡 处理组、l：ln刮n．3PUFA组、5：ln_6／n-3PUFA组、10：1n巧“3PUfA组，共计6组。n．6和 n．3 Inol／L。 PUfA处理细胞剂量参照预实验结果，单独使用时剂量为1．5×lOq 三、细胞生长曲线 将MCF．7和MDA．MB．23 ℃、5％C02的细胞培养箱中常规培养，并在倒置显微镜下观察，待细胞贴壁生长良好后加入不同处 理试剂，继续培养l～3d，每隔24h各取3孔，常规台盘蓝染色，显微镜下观察细胞生长情况并计 数，以存活细胞数(10’／m1)对培养时间(h)做图，绘制生长曲线。 四、MTT比色实验 将处于对数生长期的MCF．7和MDA．MB．23l细胞以5×104／ml的细胞密度接种于96孔培养板， 每孔200pl，每组三个平行孔，加入不同比例的n-6PUFA和n-3 h、24h、48 PUFA培养12 h，收获 细胞前4h，每孔加入15ul h，去除 MTT(5mg／ml，用pH7．4、0．1mol／L的PBS配制)，继续培养4 p 培养基，每孔加入200 值。 五、DAPI免疫荧光实验 将MCF．7细胞和MDA．MB-23l细胞以5×104／ml的密度接种于含盖玻片的6孔板，培养24h 待细胞贴壁后，加入处理因素继续培养24 7．2)漂洗细胞2次，室温下以4％多聚甲醛固 h，PBS(pH 定45min，PBS漂洗后加入终浓度为2 min，相差倒 u咖L的DAPl甲醇溶液，室温下避光放置3．5 置显微镜下观察细胞凋亡形态变化，免疫荧光显微镜下观察细胞核染色状况。 六、原位末端转移酶标技术(T州EL) TUNEL凋亡检测试剂盒购自R0che公司，按照试剂盒说明书操作。取出标记溶液(LabelSolution) 450山，酶溶液(En巧IneSolution)50“l，充分混合得到500pl反应溶液儆actionMixture)。将MCF．7 细胞和MDA-MB-23l细胞以5×104／r11l的密度接种于含盖玻片的24孔板中，待细胞贴壁后加入不 同处理因素，继续培养24 h，弃去培养基，PBS(pH7．2)漂洗2次