骨质疏松大鼠骨骼内局部单次注射辛伐他汀强化骨骼的实验研究.pdf

第四届中华骨科杂志论坛天津·2012 骨质疏松大鼠骨骼内局部单次注射辛他强化骨骼的实验研究 北京大学第三医院骨科北京100191． 杨宁崔 韩晓光冷慧杰陈强刘军党 纯理 骨质疏松症是一种无声息的全身性疾病，往往不被重视，而一旦发生骨折，治疗非常棘手。随着老 龄化社会的到来，由骨质疏松症尤其是其引发的性骨折所带来的健康问题日益严重。目前临床中多依赖 系统服用骨吸收抑制剂以阻止骨量的进一步丢失。但系统治疗药物具有服药周期长、见效慢、副作用大及 服药依从性低等缺点，且到达局部的药物浓度很低，难以在短期内迅速提高骨密度。因骨质疏松性骨折的 好发部位非常集中(约46％发生于脊柱且大多在T。。、L。椎体，约30％发生于髋部)，加之现代微创外科技术 的发展，为应用成骨制剂对易发生性骨折的骨骼进行局部重点强化提供了可能。此外，对需要行手术内 固定治疗的老年骨质疏松患者，术后三个月内内固定周围的骨量丢失速度高于药物治疗获得的骨量提升速 度，使内固定松动失败的可能性大幅增加。因此，在围手术期局部应用能够有效刺激成骨的药物迅速增加 骨量对内固定手术的成功也尤为重要。 研究发现他类药物可以促进成骨，具有一定的骨诱导作用。我们在前期工作中发现辛他不仅可 以促进骨源细胞骨形态发生蛋白(bonemorphogenetic 系统口服辛他 7周可以治疗去 大鼠的骨质疏松。本实验将小剂量辛他单次注射至骨质疏松大 鼠骨骼局部，观察其对骨小梁改建的影响，并评估其对骨密度及骨质量的影响，为将辛他应用于临床 骨质疏松的局部治疗定基础。 材料与方法 一、材料、试剂与实验设备 辛他标准品(中国药品生物制品鉴定所)；二甲基亚砜(dimethyl serum 司，美国)；牛血清白蛋白(bovine DXA 北制药，中国)；双能X线骨密度仪(XR-36 Landmark Siemens，Siemens公司，美国)：生物力学机(MTSSystem，MTS公司，美国)。 二、辛他注射液的配置 辛他标准品溶于PBS缓冲液(内含2％DMSO与O．1％BsA)，辛他的浓度分别为50mg／ml与 lOOmg／ml，同时配置Iml空白载体作为对照，气。辐照灭菌备用。 三、大鼠骨质疏松模型的建立及其分组 (3．3ml／kg)腹腔内注射麻醉后，卧位固定、常规消毒后经腰背侧脊角切口进入腹膜外，切除双侧 。低钙饮食3个月后随机分为3组(n均=12)。 四、股骨髓腔内注射辛他 10％水合氯醛(3．3ml／kg)腹腔内注射麻醉后，钝性分离股外侧肌显露近端外侧股骨，骨科减压钻( =Imm)在大转子下0．5cm处沿股骨颈纵轴方向钻入，显露骨髓腔，微量注射器分别注射辛他0，5，lOmg d以预防感染。 后，骨蜡封闭。术后肌注青霉素lO万U／d，连续3 五、测定指标 分别在局部给药后1个月和5个月随机处死动物，取左侧股骨标本，一20℃冰箱储存。 (一)骨密度测定：应用Norland双能X线骨密度仪，在动物软件模式下，由专业技术人员盲法测 of 定，反复测量三次，取平均值。感兴趣区域(region 的区域(图l左)。 Solutions Medical (二)Micro-CT扫描与重建分析：应用小动物Micro-CT(Inveon，SiemensUSA。 —47(k 第四届中华骨科杂志论坛天津·2012 率18Pro，电压600kV，电流300雌，扫描时间900ms。将股骨颈内的松质骨设置为感兴趣区域(ROI)， ROI边界紧靠股骨颈皮质骨内侧，为圆柱体型，长度为2mm，其纵轴与股骨颁纵轴平行