使用杂化颗粒C18色谱柱和乙酸流动相进行肽的高载量研究-Waters.PDFVIP

[ 应用纪要] 使用杂化颗粒C18色谱柱和乙酸流动相进行肽的高载量研究 Matthew A. LauberStephan M. Koza和Kenneth J. Fountain 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德市) 应用优势 简介 ■ 两种具备独特选择性的杂化颗粒色谱 经证实，肽在研究中是非常有用的治疗剂和标记物。通常，为了实 柱(BEH130 C18和CSH130 C18)。 现这些用途，会通过制备型反相 (RP)色谱对肽进行纯化。在大多数 情况下，纯化出来的肽必须具有高纯度。如果存在污染物，会干扰 ■ 在使用最优浓度的HOAc调节流动相时， 生物分析的结果。如果活性药物成分中存在污染物，后果将会非常 BEH130 C18和CSH130 C18获得的目标肽 严重。因此，需要较高的色谱分辨率来尽量减少与目标肽化学性质 峰比使用0.1% TFA时更窄，分离度也 非常接近的共洗脱杂质。此外，还需要色谱柱填料具有卓越的载样 更高。利用这一特性，可以通过更少 量，确保实现最佳的通量和生产率。肽分离使用的流动相中通常包 的步骤获得含有药用反离子的肽。 含强离子对试剂，例如三氟乙酸 (TFA)。但是，如果选用含有TFA 的 流动相，需要进行额外的制备步骤。由于三氟乙酸盐(TFA盐)固有的 1 ■ BEH130 C18和CSH130 C18由细胞色素c的 毒性，必须将其除去或置换 。最好使用毒性较低的反离子，尤如乙 2-3 胰蛋白酶消化液进行质控测试。 酸盐。实际上，大部分肽药都是乙酸盐或含有乙酸的液体制剂 。 因此，尽可能用乙酸(HOAc)流动相替代TFA流动相，这种做法似乎更 有优势。之前曾有研究表明，在使用HOAc流动相和等度反相色谱后，TFA 溶液中的肽(例如粗制合成肽)4-5 6 大部分转化为乙酸盐形式 。同时， 使用高浓度乙酸盐缓冲液通过简单的洗脱步骤进行梯度分离，可实 7 现更彻底的盐形式转化。 总之，使用HOAc流动相可简化纯化过程， 有利于通过更少的步骤获得所需肽和反离子。 本文研究了使用BEH C18和CSH™ C 18色谱柱进行制备型肽分离的过程。 BEH C18是一种有机硅C 18固定相，基于亚乙基桥杂化颗粒(BEH)技术， 并具有卓越的耐用性和pH稳定性。表面带电杂化颗粒 (CSH) C 18则是 沃特世解决方案 BEH C18的升级产品，其表面被修饰在酸性条件下带有微弱正电荷。以 ACQUITY UP LC® H-Class Bio 系统 下数据证明了这两种固定相均适用于高上样量的肽分离，既可用于