耐酸酵母的选育及初步应用.pdfVIP

摘要 ||IIII I II III I IIII I I I III ＼1 摘 要 耐酸酵母因其可以在低pH值的酸性条件下生长和发酵，备受人们的关注。本文研 究核心是筛选具有耐酸性能的酵母菌株，初步探讨其在通风及厌氧条件下的发酵性能及 应用，并以此耐酸酵母菌株为出发菌株，通过代谢工程改造使其能够生产L．乳酸，并对 重组菌L．乳酸发酵的主要影响因素进行了初步研究，从而为将来的工业化生产做一些基 础性工作。主要研究内容包括以下方面： 从自然界中96个样品中筛选得到2株可在含68∥L乳酸的YEPD培养基中生长良 好的耐酸酵母菌株。经形态、生理生化和分子生物学鉴定后，一株其为分类地位应属于 假丝酵母属(Candida orientalis)。以筛选出 sp．)，另一株为东方伊萨酵母(1ssatchenkia 来的耐酸酵母Candidaorientalis为研究对象，进行发酵性能初探。发现通风发酵 sp．和L 时，上orientalis在可应用于利用木薯发酵产酒精的废液来生产单细胞蛋白，其菌体干重 可达到7．40 g／L，且其酒糟废液pH由初始的3．9升至6．5以上。在对耐酸酵母在兼性厌 氧条件下发酵性能及应用进行研究中，发现Zorientalis菌株能够较好的降解山葡萄酒中 的苹果酸，发酵结束时，其苹果酸最终含量低于1∥L，苹果酸降解了约80％，且pH值 有略微升高。以筛选出来的耐酸酵母菌株为研究对象，通过代谢工程改造，通过表达外 源L．乳酸脱氢酶基因(1dhA)，增加其乳酸代谢途径，试图将代谢流引向L．乳酸形成方 向。以本实验是保存的pYX212质粒为基础载体，构建了含有米根霉As3．819的乳酸脱 入野生型耐酸酵母菌株中，筛选获得了一株具有产L．乳酸能力的重组菌株C4．2。对重 组菌进行乳酸发酵实验发现，改变其初始糖浓度、pH值、通风发酵时间以及接种量， 均能提高其乳酸产量，可达到42．4 g／L。再对乳酸脱氢酶基因的串联表达进行了初步探 入耐酸酵母Candida sp．中，得到串联重组耐酸酵母C4．E，发现C4．E的乳酸产量略低于 C4-2，说明糖酸转化率不高的原因不在于ldhA的拷贝数。 综上所述，本研究通过实验验证耐酸酵母在通风及厌氧条件下的应用前景，并对研 究利用耐酸酵母进行有机酸生产具有重要启示。 关键词：耐酸酵母，木薯酒糟，单细胞蛋白，山葡萄酒，L．乳酸，代谢工程。 摘要 Il inthefuture．The contentsareblow． mainlyresearching from foundtobe Twowildacid．resistantstrainsisolated96natural yeast samples．was ableto wellatYEPD 68 thelacticacid)．Basedonfurther grow medium(containingg／L aS otherone molecular tests．onestrainWas identified biological primarily Candida．sp；the Was identifiedasIssatchenkiaorientalis．Theacid-resistantstrainsweretaken