第二章手性药物详解.ppt

3???外消旋体拆分方法 等量对映体的混合物，其旋光性相互抵消，没有旋光能力，称为外消旋体。将外消旋体分为对映体的过程，叫做对映体拆分（resolution）。广义地讲，对不等量对映体混合物进行分离，也属于对映体拆分的范畴。 接种晶体拆分法 在一个外消旋混合物的热饱和溶液中加入其中的一个纯对映体的晶种，然后冷却，则同种的对映体将附在晶体上析出； 滤去晶体后，母液重新加热，并补加外消旋体使之达到饱和，冷却使另一对映体析出。 这样交替进行，可方便地获得大量纯对映体结晶。 在没有纯对映体晶种的情况下，有时用结构相似的其它手性化合物（有时甚至非手性化合物）作晶种，也能获得成功。（为什么？） 晶体形成时的有规律的定向排列，可能自然形成一手性环境。 D,L氯霉素的母体氨基醇的结晶拆分示意图 D,L-氨基醇水溶液 D-氨基醇，80℃ 冷至20℃ D-氨基醇晶体 母液 80℃浓缩 冷至20℃ L-氨基醇晶体 母液 3.2 生物拆分法 生物酶、微生物、细菌等生物源具有非常专一的反应特性。利用酶可以选择性地使外消旋体中的一个对映体发生反应，如降解，从而达到拆分的目的。因此，这一方法也称为“生物化学拆分法”。 1858年，Pasteur就观察到：外消旋酒石酸在酵母或青霉的存在下进行发酵，天然的（+）-酒石酸铵逐渐被消耗，而经过一段时间之后，从发酵液中分离出纯的（-）-酒石酸铵。这是微生物代谢了天然的（+）-酒石酸，而留下了（-）-酒石酸。 图5 D,L－苯基甘氨酸外消旋体的酶拆分 生物拆分特点：立体专一性强、拆分效率高和生产条件温和。目前，酶法拆分已从水溶液向有机介质发展。 D, L-苯基甘氨酸 (PG) (CH 3 C) 2 -O O D, L-乙酰PG L-氨肽酶 L-PG D-乙酰PG 水解 / H + D-PG D, L-PG H2SO4 / 加热 (外消旋化) 用微生物酶拆分外消旋体，比化学拆分法具有明显的优越性： （1）酶催化反应通常具有高度立体专一性； （2）副反应少，产率高，产品分离提纯简单； （3）反应条件较温和，如0 ~ 50℃，pH接近中性； （4）酶无毒，易降解，不会造成环境污染，适于规模生产。 用酶拆分外消旋体氨基酸特别重要。因为多数合成氨基酸消旋体不易用化学方法拆分，而酶法拆分却非常有效，可用于制备旋光性氨基酸。 3.4 色谱拆分法 如何获得高对映体纯的手性物质在许多领域都是很重要的。色谱法不仅是对映体分析和纯度测定的有力工具，而且液相色谱拆分法还是制备和纯化的重要手段。 历史上，曾采用一些天然手性吸附剂，如淀粉、蔗糖、羊毛等成功拆分一些外消旋体。现代制备色谱在拆分外消旋体方面更是发挥更大的作用。如选用拆分能力很强的手性固定相填充剂，用大柱子，一次已能拆分几十克量的外消旋体，并达到99%的旋光纯度。 4 高效手性分离技术 色谱法和电泳法是一类高效分离方法，但常规的色谱/电泳方法仍不能直接分离对映体。（为什么？） 因为在非手性环境中，对映体的分离性质（如沸点、蒸气压、溶解度、分配系数、吸附特性以及淌度）完全相同。 如何运用高效色谱和毛细管电泳分离分析对映体化合物？ ——热力学/分离性质上的差异 4.2 手性分离原理 1） 手性试剂衍生法 手性消除采用柱前衍生技术，即用光学纯的手性试剂，将对映体衍生成非对映体复合物，这些非对映体复合物具有不同的理化性质，便能使用常规的色谱技术分离。 其优点是可将手性消除和检测衍生反应结合起来。除了满足一般的色谱衍生要求的条件外，还要注意： 所用的衍生剂应尽可能达到对映体纯； 衍生剂不能选择性地与两种基质对映体反应； 生成分离性大的稳定的非对映体。 衍生后两种非对映体的检测器响应可能不同，不宜按归一化计算对映体纯度。 手性试剂衍生位置应靠近对映体样品的手性中心，以求获得最大的分离效果。过大的衍生试剂可能会缩小样品理化性质的差异，造成分离困难。 作制备用的手性衍生剂要求它的衍生化和去衍生化反应都容易进行，且总收率要高，生成的非对映体具有更大的分离性（有利于提高制备量）。 例如将氰醇衍生成Mosher酯后，可用GC或HPLC进行分离测定。苯乙醇氰Mosher酯可用毛细管气相色谱（Durabond DB-5 ，0.3×30 m柱)分离测定：而4-甲氧基苯乙醇氰Mosher酯可用高效液相色谱（Nucleosil 100-5柱）分析。 外消旋样品 手性衍生剂 非对映体，挥发性和吸附特性有差异 (-)-A·(-)-B // (+)-A·(-)-B 2)???手性色谱 手性色谱的原理是通过待拆分对