陈其军CRISPRCasbasedtoolkit分析.pptx

A?CRISPR/Cas-based Toolkit for Plant Multiplex Genome Editing, Multigene Interference, and Multigene Activation;基因组编辑工具发展历史与现状 基因组编辑（Genome editing）或基因组工程（genome engineering）或基因打靶（Gene targeting）; 2013年CRISPR/Cas研究论文; 2013年植物CRISPR/Cas研究论文; 2013年植物CRISPR/Cas研究论文;/news/show/6268.html 完美基因编辑：新方法可消除CRISPR-Cas的脱靶效应;生物360（邮件列表） Science：革命性基因编辑技术CRISPR 狂潮来势汹汹 /news/show/6826.html;;Elizabeth Pennisi.?The CRISPR Craze. Science 23 August 2013; DOI:?10.1126/science.341.6148.833;CRISPR/Cas技术在植物中应用存在的问题;2×35Sp-zCas9 U6-26p-gRNA;Vector name;构建含1个gRNA的CRISPR/Cas双元载体;构建含2个gRNA的CRISPR/Cas双元载体;构建含4个gRNA的CRISPR/Cas双元载体;靶点选择要点： N20NGG（正向或反向链）【必要】 序列特异性检查【必要】 切割点应位于外显子【必要】 切割点最好位于酶切位点中央【可选】 靶点最好是GN19NGG【可选】 单基因选双靶点可提高突变效率【可选】;使用CRISPR/Cas技术敲除玉米靶基因流程;CACCTGGTGCTGTTCCATGTGCACCCGTTCTGGATCCAAGTCCTGTACTTCCTTTTGATCTCCGTTTTGGGTTTCTTGATGCTGAGAGTCCTGCCCATGAAGTCCAGCTCCGTGCCTAGGCCCTCGGCTCTGGACCTACTCTTCACGTCGGTGTCGGCGACGACAGTCTCCAGCATGATCGCCGTCGAGATGGAATCCTTCTCTAACGCGCAGCTCCTCCTCATGACCCTCCTTATGCTCCTCGGGGGCGAGGTGTTCACAAGCATGCTTGGTCTCCACTTCACCTGCACCAAGCTCAGAAACAAGAGAGAAACACCTCATAATAATCTCCATGGTAATAGCTTAGAGCAGAGTCGTCGTCGTCACCGTCCCATGGAGATGGAAGCCCAGGCCGCCGCCGTCCAAATGGAGCTTGCAGGGTTCAACAAGGACGGCCATGGCGATTTCGCATCCATGGCTAGgttgctaatgtttatcgtgctgggctacatcttggtcgtgcacatcgccggctacgcgctcattctaatctaccttagCGTGGTCGGCAGCGCGAGAGCAGTGCTTGTTAGGAAGAGGATCAGCCTGAGCACCTTCTCCGTCTTCACGGTCGTCTCGTCGTTCGCAAACTGTGGCTTCGTGCCAACCAA^CGAGGGGATGGTGTCCTTCAAGTCCTTCCCGGGC^ATGCTCCTCCTGGTCATGCCACACATCCTGCTCGGGAACACGCTCTTCCCCATCTTCCTCAGGCTCTCCATTACGGCGCTCGAGAGGGTCACAAGGTGGCGAGACCTCTGCGAGCTGCTGAGAGACAGAGGACCCGGCGGCGGGCCAGCTGCGGCTGCCGCCGCCGCCGCTATAGGCTACGACCACCTGCTCCCGGGACCGCGCACATGGTTCCTTGCTCTCACCGTGGCGGTGTTCCTGGCGGTGCAGCTGGTGCTCTACTGCGCCATGGAGTGGGGCTCCGGTGGCCTTGGAGGGCTCAACGCGTTCCAGAAGCTCGTTGCAGCGGTCTTCATGTCCGTCAACTCCAGGCACTCCGGCGAGATGGTCGTCGACCTCGCCACCGTCTCCTCCGCCGTCGTCGTGCTGTATGTGCTCATGATgtaagtacatacctgcacacatccatcgatccatctatcagaagatcatcggtagtgttaatttggatcagatcagaagtttgtgcactacatttatcatatacttatatatgtcatgcatgcacacagaaactatcattagttttttttct