第二章鸡胚接种方法分析.pptVIP

鸡胚接种技术 公共卫生学院 王德全 一、概况 1911年Rous和Murphy首先应用鸡胚培养研究肉瘤病毒(Rous肉瘤)的繁殖。 1938年Goodpasture和Burnet等应用鸡胚繁殖病毒、Cox应用卵黄囊培养立克次氏体。 二、鸡胚的结构与生理 鸡胚是由三个胚层发育起来的，即外胚层，中胚层和内胚层，它们构成胚胎的组织与器官。 （约10日龄鸡胚的结构见图） 三、材料 （一）受精鸡卵 （二）孵卵箱或恒温箱 （三）捡卵灯，照卵灯 （四）砂轮、三棱针 （五）卵盘、卵杯 （六）其它：1ml注射器，针头，2.5%碘酒，75%酒精，镊子，无菌生理盐水，毛细吸管，橡胶吸头，液体石蜡，蜡和胶布等。 四、接种技术 （一）活胚检查 1.血管：活胚可见清晰的血管，有时可见血管搏动，死胚血管模糊成淤血带或淤血块。 2.胎动：活胚可见明显的自然运动，尤其在转动胚胎时，死胚见不到任何胎动，胚胎发红像出血样，有的呈现黑块。 3.血管网是否丰满：发育好的鸡胚可见密布丰满的血管网，也就是绒毛尿囊膜，死胚则见不到这一现象。 第一天 胚盘直径0.7cm，胚重0.2mg，在胚盘明区形成原条，其前方为原结，原结前端为头突，头突发育形成脊索神经管，中胚层的细胞沿着经管两侧，形成左右对称的呈方形薄片的体节4-5对，中胚层进入暗区在胚部的边缘出现许多红点，俗称血岛； 第二天 胚盘直径1.0cm，胚重3mg，卵黄囊羊膜绒毛膜开始形成，胚胎头部开始从胚盘分离出来，血岛合并形成血管，入孵25小时心脏开始形成，30-42小时后心脏开始跳运，可见到20-27对体节，照蛋时可见卵黄囊血管区，形似樱桃，俗称樱桃珠 第三天 胚长0.55cm，胚重20mg，尿囊开始长出，胚的位置与蛋的长轴垂直，开始形成前后肢芽，出现5个脑胞的原基，眼的色素开始沉着，有35对体节，照蛋时，可见胚和伸展的卵黄囊血管形似蚊子，俗称“蚊虫珠”； 第4天 胚长0.77cm，胚重50mg，孵黄囊血管包围蛋黄达1/3，肉眼明显看到尿囊，羊膜腔形成，胚和蛋黄分离，由于中脑迅速生长，胚胎头部明显增大，舌开始形成，照蛋时蛋黄不容易转动，胚与卵黄囊血管形似蜘蛛，俗称小蜘蛛； 第5天 胚长1.0cm，胚重0.13g，生殖腺已性分化，组织学上可确定胚的公母，胚极度弯曲，整个胚胎成“C”形，可见指（趾）原基，眼的黑色素大量沉着，照蛋时可明显看到黑色的眼点，俗称单珠或黑眼； 第6天 胚长1.38cm，胚重0.29g，尿囊已达蛋壳膜内表面，卵黄囊分布在蛋黄表面的1/2以上，由于羊膜壁上的平滑肌收缩，胚胎有规律运动，蛋黄由于蛋白水分的渗入而达到最大重量，由约占蛋重的30.01%增至65.48%，喙原基出现，躯干部增长，翅脚已可区分，照蛋时，可见头部和增大的躯干部两个小圆团，俗称双珠； 第7天 胚长1.42cm， 0.57g，尿囊液急剧增加，上喙前端出现小白点形的破壳器（卵齿），口腔鼻孔肌胃形成，胚胎已显示鸟类特征，胚胎自身有体温，照蛋时胚在羊水中不容易看清，半个蛋表面布满血管； 第8天 胚长1.5cm，胚重1.15g，肋骨肺胃明显可辨，颈背四肢出现羽毛，乳头突起，右侧卵巢开始退化，照蛋时胚在羊水中浮游，背面两边蛋黄不易晃动，俗称边口发硬； 第9天 胚长2cm，胚重1.53g，喙开始角质化，软骨开始骨化，眼睑已达虹膜，解剖时心肝胃肾肠已发育良好，尿囊几乎包围整个胚胎，照蛋时可见卵黄两边易晃动，尿囊血管伸展越过卵黄囊，俗称窜筋； 第10天 胚长2.1cm，胚重2.26g，尿囊血管到达蛋的小头，整个背颈、大腿部都覆盖有羽毛，乳头突起、龙骨突形成，照蛋时可见尿囊血管在蛋的小头合拢，除气室外，整个蛋布满血管，俗称合拢； 第11天 胚长2.54cm，胚重3.68g，背部出现绒毛，腺胃明显可辩，冠锯齿状，尿囊液达最大量，照蛋时血管加粗，色加深； 第12天 胚长3.57cm，胚重5.07g，身躯覆盖绒毛，肾肠开始有功能，开始用喙吞食蛋白 第13天 胚长4.34cm，胚重7.37g，头部和身体大部分覆盖绒毛，胫趾出现角质鳞片原基，蛋白通过浆羊膜道迅速进入羊膜腔，眼睑达瞳孔，照蛋时蛋小头发亮部分随胚龄增加而逐渐减少 第14天 胚长4.7cm，胚重9.74g，胚胎全身覆盖绒毛，头向气室，胚胎开始改变为横着的位置，逐渐与蛋长横平行 注意事项 鸡胚为一活的有机体，因此要严格无菌操作，同时动作要仔细，以免造成物理死亡。接种后24小时内死亡应不计结果。 第五节 鸡胚接种技术的应用一、人类与动物病毒的培养、 分离与鉴定 1．流感病毒的分离和鉴定 病人须采集发病初期（一般为前3天）鼻咽洗液或含漱液，加青、链霉素杀菌后，接种于鸡胚羊膜