麝香保心丸：治疗性血管新生和系统生物学研究(新).ppt

麝香保心丸：治疗性血管新生和系统生物学研究Therapeutic Angiogenesis and the Systems Biologic Research of SXBX Pill 治疗性血管新生研究背景 Folkman在1970年代早期发现血管新生：肿瘤生长:血管生长因子与血管新生相关 1983年, Kumar 等发现：心肌梗塞后有“血管生长因子” 1980年代中期，确定并纯化了多种与血管新生有关的多肽 1994年 Jeff Isner’s 实验室倡导将血管生成用于心血管研究中。 Ellis Unger’s 实验室发现应用促血管生成的蛋白质可以改善冠脉侧支。 侧支血管形成的种类 微血管生长（Angiogenesis） 血管发生（Vasculogenesis） 动脉生成（Arteriogenesis） 三者的机理是不同的 血管新生(angiogenesis) 相当于废墟上重建 在缺血区域现有血管基础上通过芽生(sprouting)、分枝方式形成成熟的血管，由初级网状血管结构到复杂网状血管结构的过程。 血管内皮细胞基底膜降解、细胞外基质消化吸收。 内皮细胞向血管生长刺激物方向移行和增殖。 移行的血管内皮细胞伸展，彼此相连形成血管芽孢。 血管内皮细胞增殖使中空的管腔延长。 血管发生（Vasculogenesis） 相当于原材料新建 血管增生——来源于中胚层前体的内皮细胞原位分化、增殖形成初级毛细血管丛。 血管重构——初级毛细血管形成互相连接、分支众多、成熟的血管结构。 动脉生成（Arteriogenesis） 相当于休闲动脉的动员 原有的侧支血管——正常心脏冠脉间存在的交通吻合血管，直径20至200μm ,呈薄壁样管状结构，通常状态下呈关闭状态。 开放不仅仅是一个被动过程，开放后会出现一系列细胞生长因子分泌、DNA合成和细胞增殖 等血管主动生长过程。 治疗性血管新生（Therapeutic Angiogenesis ） 治疗性血管新生的意义 血管新生的研究方法和进展 筛选模型—鸡胚绒毛尿囊膜实验 鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验 目前血管新生药物初步研究主要采用CAM 模型。CAM 作为一项研究体内血管效应的技术，实验材料易得、操作简便、实验周期短、结果易于观察，尤其适用于大批量血管效应药物的初步筛选。 动物急性心肌缺血模型 兔、鼠选择性冠状动脉结扎、栓塞造成动物缺血模型，给予干预后观察梗死周边区血管新生情况。 慢性心肌缺血模型 血管内皮细胞培养 血管内皮细胞培养：因为人脐静脉(HUV) 在某些方面具有与动脉生物学特征相似的优点，较之动物血管内皮更符合人体情况。 增殖：MTT比色法 迁移：Transwell小室 体外成血管：体外血管生成试剂盒 分泌：培养液内NO、VEGF 血管生长因子/抑制因子 干预因素对组织生长因子/抑制因子的影响 生长因子：VEGF、 bFGF，TGF、促血管生成素-1（Ang-1） 抑制因子：血管新生抑制素、内皮细胞抑制素、组织金属蛋白酶抑制剂、血栓反应素-1，2 (thrombospodin-12，TSP-12)、血小板因子-4(PF-4)等 促进治疗性血管新生的方法 促血管生长因子的应用 干细胞移植 药物干预 外源性输注生长因子 目前，研究最广泛的血管生成生长因子家族为VEGF和FGF。 给急性心肌梗死动物冠脉内注射bFGF，心肌梗死的面积显著缩小，缺血或梗塞心肌内毛细血管及小动脉数目增加。 VEGF是一种内皮细胞特异性有丝分裂原和活体血管新生诱导物。VEGF因其对内皮细胞作用的特异性而广泛应用于实验性肢体及心肌缺血的研究。 导入生长因子基因 近来病毒介导的基因转染已作为一种血管形成生长因子释放的方法应用于慢性缺血动物模型。 VEGF基因，PDGF基因 将含VEGFcDNA的真核表达载体pVS121吸附在球囊上，并定位转移至梗塞冠状动脉近心端。转染VEGF基因后心肌血管密度明显增加，有效促进了血管新生。 临床试验结果：并不理想 首次：冠脉内和静脉内灌注VEGF165蛋白，在60天的运动耐量、心肌灌注、心绞痛症状或功能分级等方面，治疗组并未获得显著性益处。 FGF血管重建临床试验(FIRST)：一次冠脉内灌注FGF-2，患者功能状况和症状分级显著改善，但90天后运动耐量和心肌灌注与安慰剂相比没有差异 VEGF、FGF的一系列双盲、随机的临床研究并没有成功的提出绝对清晰的治疗效果证据，与获临床承认仍有很大的差距。 骨髓干／祖细胞移植 成人EPC和造血干细胞发生于共同的干细胞，都来源于造血器官骨髓。 有希望促进血管新生并改善心功能，为