No6 20131113 体外孵育的小白鼠肝脏切片对戊巴比妥钠的代谢作用.ppt

体外孵育的小白鼠肝脏切片对戊巴比妥钠的代谢作用 南京医科大学 药理学系 【目的】 通过肝组织与戊巴比妥钠体外孵育，以睡眠开始及维持时间为指标，了解肝脏对戊巴比妥钠的代谢作用 【原理】 肝组织内含有细胞色素P450,可致戊巴比妥钠代谢失活，从而影响其催眠作用 【器材与药品】 剪刀 天平 小镊子 10ml移液管 培养皿 注射器 10ml离心管/试管 离心机 试管架 恒温水浴箱 95%氧气和5%二氧化碳混合气体 0.4%戊巴比妥钠溶液 玻棒 【实验对象】 小白鼠 【肝损伤模型】 硫代乙酰胺（TAA） 其原理是TAA入肝后延长肝细胞有丝分裂过程，并阻碍RNA从胞核到胞质的转移，进而影响依赖酶的代谢过程，最终形成肝细胞坏死.肝实质的破坏引起间质内织缔组织的生成增多，从而引起纤维组织在局部的沉积，其形成的动物模型在血流动力学、形态学及功能上的改变均与人肝硬化相似. 方法：每组取4只小白鼠，称重，分别腹腔注射硫代乙酰胺0.15ml/10g，造肝损伤模型 【步骤与方法】 1.取离心管及试管各5支，分别标记为A、B、C、D、E 2.取正常小鼠和肝损伤小鼠各两只，颈椎脱臼处死，置方盘内剖腹暴露肝脏， 【步骤与方法】 3.用镊子小心取出肝脏，置于生理盐水中漂洗，并将胆囊摘除，滤纸吸干，放在天平上称取1克肝组织（一只小鼠的肝脏） 4.将称好的肝组织放在离心管口，用小剪刀剪碎 5.A、B、C、D、E各管中均准确加入0.4%戊巴比妥钠溶液5ml。同时置于37℃恒温水浴中孵育，A、C管孵育30min，B、D、E管孵育1h，培养期间每10min通入气体一次 【步骤与方法】 6.将上述孵育液3000r/min离心5min，然后将上清液移至相应的A、B、C、D、E试管内 7.取小白鼠10只，分为A、B、C、D、E五组，每组2只，称重后均按0.1ml/10g 分别腹腔注射相应A、B、C、D、E管内上清液 【注意事项】 肝分离操作应迅速，以免延误时间影响药酶活性 肝切片孵育过程中，应经常用玻璃棒搅动离心管中的内容物，以使肝切片与药物充分发挥作用 培养液内通气时气泡需小而均匀，勿超过培养液的液面 【预测结果】 睡眠潜伏时间 E C D A B 睡眠持续时间 E C D A B 【讨论】 戊巴比妥钠经肝、受损肝组织孵育后，对小鼠的睡眠有什么影响？为什么？ 【结论】 1.戊巴比妥钠经肝脏代谢 2.戊巴比妥钠有镇静、催眠作用 药物代谢 药物作为一种异物进入体内后，机体要动员各种机制使药物发生化学结构的改变，即药物的转化或称生物转化又称药物代谢，从体内消除，代谢是药物在体内消除的重要途径 体内各种组织均有不同程度的代谢药物的能力，但肝脏是最主要的的药物代谢器官 体内药物代谢有一部分不经酶促而自动发生，但绝大多数药物是通过特异性细胞酶催化的 巴比妥类药物的抗惊厥作用 【目的和原理】 了解大剂量中枢兴奋药尼可刹米的中毒表现－－惊厥 观察巴比妥类的抗惊厥作用 【实验步骤】 取体重相近的小白鼠2只，分别编号、标记 两只分别腹腔注射生理盐水和0.5% 戊巴比妥钠溶液0.15ml/10g 15min后，分别皮下注射5%尼可刹米溶液0.1ml/10g，盖好笼盖，观察现象 【结果】 注射生理盐水的小鼠出现惊厥 注射戊巴比妥钠的小鼠没有出现惊厥 尼可刹米：对延脑呼吸中枢有直接兴奋作用，可提高中枢对CO2的敏感性。还可通过刺激颈动脉体和主动脉体化学感受器而反射性的兴奋呼吸中枢，使呼吸加深加快。本品在呼吸抑制时兴奋作用尤为明显。临床用于中枢性呼吸抑制及循环衰竭、各类继发的呼吸抑制 巴比妥类：有较强的抗惊厥和抗癫痫作用。对多种原因引起的惊厥有较好的疗效。 【结论】 过量尼可刹米可致惊厥，戊巴比妥钠有抗惊厥作用 注意保持胆囊的完整，先去除胆囊，再取肝脏 【流程图】 A B C D E 正常肝 1g 正常肝 1g 受损肝 1g 受损肝 1g 0.4%戊巴比 妥钠溶液5ml 37℃孵育 通气 30mim 60mim 30mim 60mim 60mim 3000r/mim 5mim 取上清液 2只 2只 2只 2只 2只 记录给药时间、翻正反射消失及恢复时间 腹腔注射 【实验结果】 组别 处理 给药时间 翻正反射 消失时间 翻正反射 恢复时间 睡眠潜伏 期/min 睡眠持续 时间/min A B C D E 正常肝孵 育30min 正常肝孵 育60min 受损肝孵 育30min 受损