中药甲亢宁胶囊对FRTL5细胞TSHR信号转导通路作用机制研究.pdfVIP

目 录 摘要…………………………………………………………………………………1 ABSTRACT……………………………………………………………………………………………………．4 中英文缩略词表………………………………………………。……………………．8 1 第一部分文献综述………………………………………………………………．．1 TSHR胞内信号转导通路在GRAVES病发病机制的研究进展………………．1l 甲状腺功能亢进症的中医药治疗进展…………………………………………一17 第二部分 导师魏军平教授治疗甲亢用药特点…………………………………一20 第三部分 中药甲亢宁胶囊对FRTL一5细胞TSHR信号转导通路的作用机制研 究……………………………………………………………………………………．．27 材料和方法………………………………………………………………………一27 结 果………………………………………………………………………………………………………38 讨论……………………………………………………………………………．．52 结j念………………………………………………………………………………………………………．60 参考文献……………………………………………………………………………．．61 致谢………………………………………………………………………………．．67 个人简历……………………………………………………………………………．．68 万方数据 中药甲亢宁胶囊对FRTL-5细胞TSHR信号转导通路的作用机制研究 摘要 目的： 1．探讨甲亢宁对TSHR胞内信号转导通路的影响。 2．探讨甲亢宁治疗甲亢的作用机制与促进细胞凋亡的关联性。 方法： 1．我们采用MTT法检测了甲亢宁的不同浓度及作用时间对FI盯L．5细胞的 影响，探索甲亢宁的量效和时效关系，从而确定甲亢宁的浓度及作用时间。 2．我们采用荧光倒置显微镜观察经过甲亢宁干预后FRTL。5细胞的形态，并 采用CCK．8法检测甲亢宁干预后FRTL．5细胞增殖的情况。 3．我们采用流式细胞技术检测了甲亢宁对FRTL．5细胞凋亡的影响。 4．我们采用放免法检测甲亢宁干预后FRTL．5细胞上清液中cAMP的含量。 5．我们采用Western Blot检测了甲亢宁干预后FRTL一5细胞TSHR信号转导 通路相关蛋白的表达。 结果： 1．甲亢宁的量效和时效关系 甲亢宁具有抑制细胞增殖的作用，而且随着浓度的增加、时间的延长，其 抑制作用越强。甲巯咪唑则无抑制细胞增殖的作用。由此我们选定甲亢宁和甲 巯咪唑的浓度和作用时间为3mg／ml甲亢宁、10ug／ml甲巯眯唑，作用时间为24h。 2．甲亢宁对FRTL一5细胞增殖的影响 ①甲亢宁作用于FRTL一5细胞形态学观察：基线组细胞数量少；体积略小； 培养液中漂浮有细胞碎片。模型组细胞数量明显增多：细胞体积大，细胞轮廓 清晰，形态饱满；可见伪足样胞质突起；胞浆内可见黑色点状颗粒：高倍镜下 清晰可见细胞核，核浆比大，细胞核为圆形，可以见到核仁。甲亢宁组细胞数 量明显减少，细胞固缩，体积变小；胞浆内出现空泡；不能清晰的分辨出细胞 核和核仁。甲巯咪唑组细胞数量明显多：细胞体积大，细胞轮廓清晰，形态饱 满；可见伪足样胞质突起；胞浆内可见黑色点状颗粒：高倍镜F清晰可见细胞 核，核浆比大，细胞核为圆形，可以见到核仁。 ②甲亢宁对FRTL．5细胞增殖的影响：采用CCK．8法检测了各组FRTL一5 万方数据 中国中医科学院2014年申请I临床医学硕士专业学位论文 有统计学意义 P O．05 。 3．甲亢宁对FRTL．5细胞凋亡的影响 采用流式细胞技术检测了各组FRTL．5细胞的凋亡率，根据试剂盒巾荧光 染料与细胞的结合部位不同，可以将调亡分为早期凋亡及中晚期调亡。在细胞 有统计学意义 P 0．05 。在细胞的中晚期凋亡率中，各组之间差异无统计学 意义。在细胞总凋亡率中，甲亢宁组 35．63±8．70 明显高于模型组 10．28± 学意义 P 0．05 。 4．甲亢宁对FRTL一5细胞cAMP释放量的影响 采用放免法检测了各组FRTL．5细胞上清液中cAMP的含量，模型组为 2．80 ±0．13 pmol／m1 高于基线组 1．88±0．09pmol／m1 ，P O．01；甲亢宁组为 2．54 ±o．10 pmol／m1 低于模型组 2．80+0．13pmol／m1 ，P O．05；甲亢宁组为 2．54 ±0．10 pmol／m1 低于甲巯咪唑组 2．79-4-0．07pmol／m1 ，P O．05；甲巯咪唑组 与模型组差异没有统计学意义 P O．05 。 5．甲亢宁对FRTL一5细胞TSHR信号转导通路的影响 ①甲亢宁对FRTL．5细胞PKAc蛋白表达的影响：