第二章酶的结构与功能资料.ppt

第二章酶的结构与功能在生物化学发展历史上，酶学是个经久不衰的主题，一方面，代谢途径及其调控机制的阐明有赖于关键酶的分离、纯化及其动力学和调控的研究，另一方面，许多酶又是研究蛋白质、核酸和聚糖结构与功能的重要工具。随着生物化学和分子生物学相关领域以及其它学科的发展，尤其是结构生物学、蛋白质组学、基因工程、蛋白质工程和免疫学的理论和技术向酶学的渗透，为酶学发展注入新的活力。当前，酶学发展主要有两大方向：即分子酶学和应用酶学。分子酶学重点研究酶的分子生物学，酶的分子结构、作用机制和调控，酶的合成、分拣、转运和定位等。应用酶学则包括酶法分析、酶工程、组织酶学、药理酶学、食品酶学等。2.1.酶促反应动力学化学热力学说明反应的起点和终点，解决反应的方向和限度。动力学研究反应速度及各种因素如何定量地影响反应速度。酶仅在热力学允许的范围内加速反应进程，或将耗能反应与放能过程相偶联。2.1.1单底物酶促反应动力学2.1.1.1Michaelis—Menten方程：2.1.1.2Km和Vmax的意义2.1.1.3催化常数（Catalyticconstant,Kcat）或转换数（turnovernumber,TN）常用Kcat/Km表示酶的催化效率，为酶专一性的定量尺度。2.1.1.4作图法求Km和Vmax（1）Lineweaver-Burk作图法：（2）Eadie-Hofstee作图法：（3）Hanes-Woolf作图法：（4）Eisenthal和Cornish-Bowden作图法2.1.2多底物酶促反应的动力学2.1.2.3双底物产物反应的动力学方程2.1.2.1Cleland命名与表示法双底物双产物酶促反应动力学分类2.1.2.2（2）序列随机反应（1）序列有序反应（1）乒乓机制的反应动力学及作图（2）序列机制的反应动力学方程及作图（3）乒乓反应序列有序反应序列随机反应乒乓反应乒乓机制的反应动力学及作图序列机制的反应动力学方程及作图2.2酶的抑制作用凡能降低酶催化活性的物质均可认为是酶的抑制剂。酶在抑制剂作用下活力下降甚至丧失，称为抑制作用。（1）抑制程度表示方法：（2）抑制作用的分类：（3）不可逆抑制与可逆抑制的鉴别：2.2.1可逆抑制作用2.2.1.1竞争性抑制图2.10竟争性抑制的二次作图竞争性抑制竞争性抑制的双倒数作图氨甲喋呤四氢叶酸水合型水合型瞟水合型嘌呤核糖核苷2003年美国FDA批准的抗HIV药是HIV蛋白酶抑制剂过渡态（transitionstate）底物（S≠）比基态底物（S）更易与酶结合并形成产物，因而过渡态类似物比一般的底物类似物有更强的抑制效应。2.2.1.2非竞争性抑制2.2.1.3反竞争性抑制2.2.1.4混合性抑制表2.2几种同位抑制作用动力学的比较表2.3双底物反应中同位可逆抑制剂的抑制类型2.2.1.5底物抑制与产物抑制反竞争性抑制混合性抑制混合性抑制的双倒数作图2.2.2不可逆抑制作用2.2.2.1非专一性不可逆抑制剂：主要有以下几类（1）有机磷化合物（2）有机汞、有机砷化合物（3）烷基化试剂（4）青霉素、头孢霉素（5）氰化物、硫化物和CO（6）重金属盐Ag+、Cu2+、Hg2+、Pb2+等重金属离子胰蛋白酶与牛胰胰蛋白酶抑制剂的复合物2.2.2.2专一性不可逆抑制剂（1）KS型专一性不可逆抑制剂（活性部位定向抑制剂或亲和标记试剂）：部分结构与底物类似，可直接结合于活性部位，另一部分则与活性中心某基团反应，对其进行共价修饰使E失活，如TPCK对胰凝乳蛋白酶。（2）Kcat型专一性不可逆抑制剂（自杀性底物，suicidesubstrate）：具有类似于底物的结合和反应基团，可结合于酶的活性部位并在其作用之下发生反应；与底物不同的是它还有潜伏的反应基团，受酶催化之后即被活化，与酶活性中心某基团共价结合，使酶丧失活性。KS型专一性不可逆抑制剂对甲苯磺酰－L－苯丙氨酰氯甲基酮（TPCK）对甲苯磺酰－L－苯丙氨酰氯甲基酮（TPCK）对甲苯磺酰－L－苯丙氨酰氯甲基酮（TPCK）Kcat型专一性不可逆抑制剂2.3酶的作用机制酶催化的专一性包括底物结合专一性和催化作用专一性。前者要求酶选择与其活性部位的几何形状和大小相吻合的底物；后者要求底物具备合适的键或基团，在ES中与酶的催化基团间有足够大的作用力。底物结合专一性与KS相关，而Kcat/Km反映催化专一性。2.3.1酶的活性中心2.3.1.1活性中心的特点：①仅占酶分子总体积的一小部分（通常约1~2%），催化中心一般由2～3个残基（和辅因子）组成，最常见的残基如His、Ser、Asp等。结合中心因酶而异；②活性中心的三维结构由其一级结构决定，与特定的环境有关，凡破坏蛋白质构象的因素（变性）均使酶失活；③酶在与底物结合的过程中相互诱导，使酶的活性中心的几何形状和大小与底物