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细胞增殖是生命的基本特征,种族繁衍、个体发育、机体修复等都离不开细胞增殖。 初生婴儿有1012个细胞,成人1014个,约200种类型。 成人体内每秒钟有数百万新细胞产生,以补偿衰老和死亡的细胞。 一个大肠杆菌若按20分钟分裂一次,并保持这一速度,则两天即可超过地球的重量。 第一节 基本概念 一、什么是细胞周期 由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程,叫细胞周期。分为4个期: G1期(gap1),指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间。 S期(synthesis phase),指DNA复制的时期。 G2期(gap2),指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间。 M期又称D期(mitosis or division),细胞分裂开始到结束。 从增殖的角度来看,可将高等动物的细胞分为三类: ①连续分裂细胞,如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞。 ②休眠细胞暂不分裂,但在适当的刺激下可重新进入细胞周期,称G0期细胞,如淋巴细胞、肝、肾细胞等。 ③不分裂细胞,指不可逆地脱离细胞周期,不再分裂的细胞,又称终端细胞,如神经、肌肉、多形核细胞等 二、细胞周期时间的测定 细胞周期的时间长短与物种的细胞类型有关。通常G1期持续时间差异较大,M期最短约0.5~4.5小时。 标记有丝分裂百分率法(percentage labeled mitoses,PLM):对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、利用放射自显影技术显示标记细胞,通过统计标记有丝分裂细胞百分数的办法来测定细胞周期。放射标记物为3H或者14C标记的TDR。 三、细胞同步化 细胞同步化(synchronization)是指在自然过程中发生或经人为处理造成的细胞周期同步化。 (一)自然同步化 1、多核体:如:粘菌、疟原虫。 2、某些水生动物的受精卵:如海胆、海参、两栖类。 3、增殖抑制解除后的同步分裂:如真菌的休眠孢子移入适宜环境后,它们一起发芽,同步分裂。 (二)人工同步化 1、选择同步化 1)有丝分裂选择法:M期细胞与培养皿的附着性低,振荡脱离器壁收集。 优点:操作简单,同步化程度高,细胞不受药物伤害。 缺点:获得的细胞数量较少(分裂细胞约占1%~2%) 。 2)细胞沉降分离法: M期细胞体积大,可用离心分离。 优点:可用于任何悬浮培养的细胞。 缺点:同步化程度较低。 2、诱导同步化 1)DNA合成阻断法:选用DNA合成的抑制剂,可逆地抑制DNA合成。常用TDR双阻断法: 在细胞处于对数生长期的培养基中加入过量TDR(Hela 2mol/L;CHO 7.5mol/L)。S期细胞被抑制,停在G1/S交界处。移去TDR,释放时间大于TS时,再次加入过量TDR。 优点:同步化程度高 缺点:产生非均衡生长,个别细胞体积增大。 2)中期阻断法 用秋水仙素等细胞分裂抑制剂将细胞阻断在中期。优点是无非均衡生长现象,缺点是可逆性较差。 第二节 有丝分裂 一、细胞分裂的类型 无丝分裂(amitosis):又称直接分裂,由Remark(1841)发现于鸡胚血细胞,不涉及纺锤体形成及染色体变化 。 有丝分裂(mitosis) :又称为间接分裂,由Fleming (1882)年首次发现于动物,Strasburger(1880)发现于植物。 减数分裂(meiosis):染色体复制一次,细胞连续分裂两次。 二、有丝分裂 为了便于描述人为的划分为六个时期: 间期(interphase); 前期(prophase); 前中期(premetaphase); 中期(metaphase); 后期(anaphase); 末期(telophase)。 其中间期包括G1期、S期和G2期,主要进行DNA复制、中心体复制、细胞体积增大等准备工作。 S期中心粒已完成复制,在前期移向两极,两对中心粒之间形成纺锤体微管,核膜解体时,中心粒已到达两极,并形成纺锤体。 纺锤体有三种微管结构: ①极体微管(polar mt)两极间的微管,在纺锤体中部重叠,重叠部位结合有分子马达 。 ②着丝点微管(kinetochore mt),是从着丝点到另一极的微管; ③星体微管(astral mt),由中心粒放射出来的微管。植物没有中心粒和星体,其纺锤体称无星纺锤体。 Anaphase A: separation of the sister chromatids. Anaphase B: separation of the poles. Microtubules and Motors in the spindle (五)末期 从子染色体到达两极,至形成两个新细胞为止的时期。涉及子核的形成和胞质分裂两个方面。 动物细胞的胞质分裂通过胞质收缩环的收缩实现,收缩环由大量平行排列的肌动蛋白组成。 用细胞松弛素处理这一时期的细胞,会出现什么现象? 植物细胞
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