血凝与血凝抑制实验绪论.pptVIP

血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验 一、实验目的 二、实验内容 三、实验原理 四、实验材料 五、实验方法与结果判定 六、注意事项 七、新城疫背景介绍 一、实验目的 1、掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操 作方法和结果判定方法 2、了解新城疫有关背景知识 二、实验内容 1、血凝试验(HA)检测新城疫抗原 2、血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理 1、血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应。 病毒颗粒 红细胞 2、血凝抑制试验（HI）原理：当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI）反应，也称血凝抑制反应。 I am late！ 抗体 抗原 四、实验材料 1、血凝板（2人/块） 2、新城疫阳性血清 3、被检血清（1份） 4、1％红细胞悬液 5、稀释液 6、移液器（50ul, 2人/把） 7、枪头 五、实验方法与结果判定 血凝试验（HA) 1、在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul生理盐水 2、在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul 3、每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul 4、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 5、结果判定 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 2 × 4 × 8 × 16 × 32 × 64 × 128 × 256 × 512× 1024 × 2048 × 红细胞对照 生理 盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 抗原 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃50 红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 结果 ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － － － － 血凝效价测定 结果判定标准 1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、 ＋＋ ：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集； 4、 ＋ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集； 血凝价的判定 以出现＋＋（50％凝集）的抗原最高稀释倍数为该抗原的血凝价（1:128）。 50ul 1:256稀释的病毒抗原为该抗原的一个血凝单位。 稀释倍数 2 × 4 × 8 × 16 × 32 × 64× 128 × 256 × 512 × 1024 × 2048 × 细胞 对照 结果 ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ＋＋＋ ＋ ＋＋ ＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋ ＋ — — — — 血凝抑制试验 1、将病毒抗原稀释成4个血凝单位（1/128×4=1:32） 2、在血凝板上1－12孔内各加入50ul生理盐水； 3、在第1孔内加入被检血清50ul，然后倍比稀释至第11孔，最后弃50ul； 4、第1－12孔内加入4单位抗原50ul（第12孔为病毒对照）； 5、每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul； 6、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 6、结果判定 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 2 × 4 × 8 × 16 × 32 × 64 × 128 × 256 × 512× 1024 × 2048 × 病毒对照 生理 盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 血清 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃50 4单位抗原 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 结果 － － ＋ ＋＋ ＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － 血凝抑制效价测定 结果判定标准 1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、 ＋＋：红细胞形成一个环状，四周有下凝集块，即50％凝集； 4、 ＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。 血凝抑制价