由黑曲霉引发的单宁酸高效效降解分析.ppt

Efficient degradation of tannic acid by black Aspergillus species 由黑曲霉引发的单宁酸高效效降解 结论 1、与其他霉菌相比，黑曲霉能够利用碳源，在含有高浓度的单宁酸的培养基中生长是明显的特征。 2、黑曲霉的表型与其分解单宁酸的能力没有必然的联系。 3、单宁酶同源基因在不同的黑曲霉中都找到，它们的表达产物作用于不同单宁酸分子，同时其他的酶也可能参与了单宁酸的降解。 * * * 模板来自于 * 报告人:-- 结果分析 实验材料和方法 简介 讨论 目录 1.单宁酸的利用 2.单宁酶 1.品种和培养条件 2.黑曲霉在含有单宁酸培养基上的分离 3.线粒体DNA RELP鉴定 4.颜色突变体的分离 5.单宁酶基因 背景 黑曲霉菌丛呈黑褐色，顶囊大球形，小梗双层，分生孢子为球形，呈黑、黑褐色，平滑或粗糙。对紫外线以及臭氧的耐性强。菌丝发达，多分枝，有多核的多细胞真菌。分生孢子梗由特化了的厚壁从膨大的菌丝细胞（足细胞）上垂直生出；分生孢子头状如“菊花”。黑曲霉的菌丝、孢子经常呈现各种颜色，如：黑、棕、绿、黄、橙、褐等，菌种不同，颜色也不同。 黑曲霉能够利用植物单宁酸作为碳源，同时黑曲霉具有安全性，因此广泛应用于有机酸、酶的生产以及食品发酵工业。 简介 1、 能够生长在高浓度的单宁酸环境中是黑曲霉独有的特性，同时我们可以根据这一特性对它进行定性和定量的分离。 2 、 黑曲霉黑色素的产生与它降解单宁酸的能力没有什么必然的联系。 3、在相关物种检测中， A. niger 基因组中包含许多同系物都有的单宁酶基因。本文还讨论黑曲霉它们这种独特的生态位与其高效降解单宁酸的能力的联系。 本文的研究表明了了： 实验材料和方法 一、品种和培养条件 50种荷兰，英国和印尼野生型黑曲霉菌株，在非选择培养基中分离出黑曲霉，47种黑曲霉的菌种保藏菌株和相关曲美。在基本培养基或完全培养基中培养，并向内补充1mg/L硫酸锌，硫酸亚铁，氯化锰和硫酸铜。液体完全培养基中补充不同浓度的单宁酸，酸性越强的单宁酸会阻止琼脂凝固。含有5%单宁酸的培养基PH3.3, 20%单宁酸的培养基PH2.65. 天然黑曲霉菌株的标准分离是含有20%单宁酸的完全培养基中进行的，并且在30℃下培养。 二、黑曲霉在单宁酶培养基中分离： 收集土壤和腐殖质上层样品（5~50g），用作接种物接种于CM+tan培养基上。样品储存于5℃下，可在两周内用于分离。所使用的新鲜土壤或稀释物等份试样取决于其中繁殖体的密度。5天后在MM上分离纯化所有漂浮的曲霉菌落。估测局部孢子密度并根据线粒体单体型对所有菌株进行分类。 三、线粒体DNA限制性酶切片段长度多态性鉴定： 所有黑曲霉菌株，无论是通过培养物收集还是天然分离获得的，均通过线粒体多态性单体型基础进行分类。通过苯酚/氯仿萃取总核酸：过夜±0.1克菌丝体丛，生长在液体CM，被用液氮冷冻在1.5ml EP管中，并在0.5ml的EP管中用杵破坏其大小，移入更大的小瓶中。加入预热的提取缓冲液（0.5M NaCl ， 10 mM Tris-HCl ，10 mM Na2EDTA， 1% SDS， pH 7.5 ）于悬浮液中，在65 ℃孵育30分钟。 限制性酶切：核酸然后用1:1酚：氯仿萃取一次和用24：1的氯仿：异戊醇萃取一次。异丙醇用来沉淀核酸，沉淀用70％的乙醇洗涤，最后用德米水或TE缓冲液（10 mM Tris/10mM EDTA，pH 7.5）重悬核酸沉淀。 四、颜色突变体的分离 紫外照射后两天肉眼观察生长在基本培养基平板上的非黑色的分生孢子。纯色突变被分类为浅黄褐色（ fwn ），褐色（ brn ），白色（ whi ），灰色（ gry ）或橄榄绿（ olv ）。 五、单宁酶基因 A.niger单宁酶基因在Genbank进行同源性序列查找。A. fumigatus Af293的序列在.网站基因组研究所获得。A. nidulans FGSC-4a在序列.网站获得....... 表中所有的黑曲霉都能在含有20%单宁酸的培养基中生长而非黑曲霉则不能 在含有5%的单宁酸培养基中生长。这表明在含有20%单宁酸培养基中生长是 黑曲霉所特有的能力。 不同颜色的黑曲霉均能在含有20%的单宁酸培养基中生长，这说明黑曲霉的表型与其分解单宁酸的能力没有必然的联系。 此图为不同颜色的突变菌株在含有高浓度单宁酸的培养基中的生长情况。 * * 模板来自于 *