N―乙酰半胱氨酸对肺纤维化大鼠Smad3基因表达的影响.docVIP

N―乙酰半胱氨酸对肺纤维化大鼠Smad3基因表达的影响 　　[摘要] 目的 探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对博莱霉素（BLM）诱导的大鼠肺纤维化模型Smad3表达的影响及意义。方法 选取2013年5～12月提供的健康Wistar大鼠60只，随机分为四组，每组15只。A组：单纯BLM处理组，B组：BLM处理及氢化可的松琥珀酸钠干预组；C组：BLM处理及NAC干预组；D组：空白对照组。四组动物在给药处理后的第7、14天和28天随机处死5只；用免疫组化检测肺组织中Smad3蛋白表达水平。结果 不同时期各组大鼠Smads 蛋白表达：A组Smad3 蛋白表达最强，B组次之（P0.05），D组最低（P0.05）。结论 NAC通过参与调控博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织Smad3的表达，抑制大鼠肺纤维化程度。 　　[关键词] 肺间质纤维化；N-乙酰半胱氨酸；Smad3；RT-PCR 　　[中图分类号] R563 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）02（a）-0089-02 　　N-乙酰半胱氨酸（NAC）是谷胱甘肽（GSH）的前体，肺组织主要的抗氧化系统是由NAC/GSH及其氧化还原酶构成的，研究表明，氧化/抗氧化失衡是肺间质纤维化的重要机制之一[1-2]。此外，越来越多的证据表明多种细胞因子共同参与是导致肺间质纤维化的主要原因，其中转化生长因子β（TGF-β）是最重要的促纤维化的因子之一。而Smads蛋白中Smad3是TGF-β/Smad信号传导通路中的主要信号蛋白。2013年5～12月该研究通过建立博莱霉素诱导的大鼠肺间质纤维化模型，观察NAC干预对Smads家族成员Smad3表达的影响，在分子水平上研究NAC对肺间质纤维化的影响，现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　2013年5～12月取Wistar大鼠60只（由大连医科大学动物中心提供），周龄4～6周，体重180～220 g，随机分为4组，每组各15只。A组：单纯BLM处理组，采用Tang H等[3]研究方法制备肺纤维化模型；B组：BLM处理及氢化可的松琥珀酸钠干预组，模型制备同A组方法，此外每日给予氢化可的松琥珀酸钠（25 mg/kg）腹腔注射；C组：BLM处理及NAC干预组，模型制备同A组方法，但于BLM处理后每天（至处死）强饲法口服NAC（3 mmol/kg）；D组：空白对照组，参照Tang H等[3]的方法气管内注入生理盐水代替博来霉素。四组动物在给药处理后的第7、14 天和第28天随机处死5只，取大鼠肺组织进行免疫组化处理。 　　1.2 支气管肺组织病理改变观察 　　利用免疫组化染色以及图像分析技术。免疫组化结果判定：①对细胞着色强度进行计分：将肺泡巨噬细胞着色深浅分用0～4分四级计分；②对阳性细胞进行百分比计分：标记指数根据阳性细胞数所占百分比得出，即U=阳性细胞数/200个巨噬细胞（成纤维细胞）×100%分为I-V五级计分。①×②即为该例标本的免疫组化判定分值。 　　1.3 统计方法 　　数据处理采用SPSS 13.0统计学软件进行。用均数±标准差（x±s）表示所有计量资料，等级计数资料转化为计量资料，具体方法如下：0分表示0级，1分表示I级，2分表示Ⅱ级，3分表示Ⅲ级。显著性分析采用单因素方差分析进行。 　　2 结果 　　2.1 肺组织病理变化 　　对病理半定量进行评分，结果如下：D组未出现明显病理改变情况。A组第7天有大量炎性细胞浸润，出现肺泡间隔明显增宽情况，14 d出现大量成纤维细胞、平滑肌细胞，伴有胶原纤维沉积，28 d可见双肺大量纤维化形成，肺泡结构破坏，毛细血管管腔较前明显增厚，但炎性细胞较前减少。B组和C组肺泡炎和纤维化程度均较A组有所减轻（P0.05），但仍较D组严重（P0.05）（表1）。 　　2.2 肺组织Smad3蛋白表达 　　各组Smad 3蛋白表达（见表2，免疫组化染色图片见图1～3）结果如下：D组于少量血管内皮细胞、支气管粘膜上皮细胞胞浆呈弱阳性表达。A组在巨噬细胞、肺泡上皮细胞及增生的成纤维细胞胞浆中呈强阳性表达。B组和C组蛋白表达强度明显弱于A组（P0.05），但仍高于D组（P0.05）。见表2。 　　表2 肺组织Smad3蛋白表达评分比较（x±s） 　　注：与D组比较，*P0.05。 　　图1 第7天时Smad3蛋白免疫组化染色图片（×100） 　　图2 第14天时Smad3蛋白免疫组化染色图片（×100） 　　图3 第28天时Smad3蛋白免疫组化染色图片（×100） 　　3 讨论 　　肺间质纤维化是一种弥漫性肺实质的渐进性疾病，其具体发病机制目前尚未阐明。现阶段主要应用糖皮质激素和细胞毒类药物， 毒副作用较大，效果欠佳。