补阳还五汤对运动性疲劳大鼠骨骼肌.docVIP

补阳还五汤对运动性疲劳大鼠骨骼肌 　　摘要：目的： 探讨补阳还五汤对运动性疲劳大鼠骨骼肌AMPK蛋白表达的影响。方法：雄性SD大鼠随机均分为正常对照组和补阳还五汤低、中、高剂量组，每组10只。常规饲料喂养外，分别给低、中、高剂量组12.5、25.0、50.0 g.kg-1的补阳还五汤灌胃，对照组给予等量生理盐水，连续给药7天。采用负重游泳实验建立大鼠力竭模型。电镜观察骨骼肌细胞线粒体超微结构，Real-timePCR法测定骨骼肌AMPK蛋白表达。结果： 运动性疲劳大鼠骨骼肌线粒体数量显著减少，空泡化，线粒体嵴断裂，而补阳还五汤药物干预后，骨骼肌线粒体形态趋于正常;模型组大鼠骨骼肌组织AMPK蛋白表达水平较正常对照组、补阳还五汤组明显降低，差异有统计学意义（P0.05）。结论：补阳还五汤具有一定的抗运动性疲劳作用，其机制可能与其增加骨骼肌AMPK蛋白表达，增强线粒体功能有关。 　　关键词：补阳还五汤;运动性疲劳;线粒体;AMPK 　　运动性疲劳指机体运动导致机体生理过程不能持续其功能在特定水平上和（或）各器官不能维持预定的运动强度下降的现象[1]，随着竞技体育竞争日趋激烈，如何克服运动性疲劳一直是运动医学最为关注的课题。祖国传统医学认为运动性疲劳属“劳倦”范畴，“劳则气耗”，阳气不足，气虚运血乏力而导致血行不畅的虚劳之症。补阳还五汤由黄芪、当归、芍药、川芎、桃仁、红花、地龙组成，是益气活血的代表方剂，但其对运动性疲劳的影响未见报道，2014年5月至2014年10月我们进行本研究，旨在探讨补阳还五汤对骨骼肌线粒体形态及AMPK蛋白表达的影响，探讨其对运动性疲劳的干预机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 药品及试剂 补阳还五汤由黄芪、当归、芍药、川芎、桃仁、红花、地龙组成（购于北京同仁堂医药公司承德分公司），通过水煎醇沉法制备浓度为5.0 g.ml-1提取物备用。MDA、SOD、GSH-Px、尿素氮、乳酸、肝糖原检测试剂盒均购于南京建成生物工程研究所（批号。 　　 1.2 实验动物分组及给药 雄性SD鼠40只（北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：scxk（京）2009-0004），体质量210～230g，9～12 w龄。适应性喂养1周后，随机分为力竭模型组、补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组，每组10只。常规饲料喂养外，分别给低、中、高剂量组12.5、25.0、50.0 g.kg-1的补阳还五汤灌胃，对照组给予等量生理盐水，连续给药7天。 　　2 指标检测 　　2.1 负重游泳试验 末次给药1h后，开始负重游泳试验。大鼠尾悬挂体质量5%的铅坠置于水深为40 cm，水温为（28±2）℃，直径为120 cm的圆形游泳池内。记录大鼠从开始游泳至头部全部沉入水中l0s不能自主浮出水面，取出后头不能自由抬起的时间（即为力竭时间）。 　　2.2 骨骼肌线粒体超微结构 　　负重游泳试验结束后，取骨骼肌组织，3.5%戊二醛固定，1%饿酸后固定，常规电镜样品包埋，超薄切片，铀-铅双染，电镜观察。 　　2.3 骨骼肌MAPK蛋白的表达 负重游泳试验结束后，取骨骼肌组织分析天平称重后，置于提前预冷的生理盐水中，制成10%的匀浆，3500 r/min离心10 min，取上清液，BCA法蛋白定量，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、转膜、杂交，ECL发光液显影，LI-COR Biosciences软件读片。 　　2.4 统计分析 　　 实验数据以均数±标准差（`x±s）的形式表示，采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析，组间计量资料的比较采用单因素方差分析，P0.05为差异有统计学意义。 　　3 结果 　　3.1 各组大鼠负重游泳力竭时间及力竭时间延长率比较 与力竭模型对照组比较，补阳还五汤药物干预各组大鼠负重游泳力竭时间明显延长（P0.05）。见表1。 　　表1 补阳还五汤对大鼠负重游泳力竭时间及力竭时间延长率的影响（n=10）`x±s 　　 　　与对照组比较：* P0.05 　　3.2 各组大鼠骨骼肌线粒体超微结构变化 电镜下正常对照组线粒体大小形态正常，线粒体饱满，嵴清晰，核膜清楚;力竭模型组大鼠骨骼肌组织线粒体数量减少，部分线粒体呈空泡样或烧瓶样变，线粒体嵴断裂或消失，粗面内质网肿胀;补阳还五汤药物干预组骨骼肌线粒体数量较模型组显著增多，线粒体肿胀变性减轻，形态趋于正常。 　　3.3 各组大鼠骨骼肌组织MAPK蛋白含量比较 与力竭模型对照组比较，补阳还五汤药物干预各组大鼠肌肉组织MAPK蛋白表达明显升高（P0.05），表明补阳还五汤可以上调运动性疲劳大鼠骨骼肌MAPK蛋白的表达。 　　表3 补阳还五汤对力竭大鼠肌肉组织MAP