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目
录
中文摘要……………………………………………………………………1
英文摘要……………………………………………………………………4
研究论文食管鳞状细胞癌患者再生因子10【表达的临床意义
前言……………… ………“一“…………一”…“…一 ”…“一一……“?8
材料与方法……………………………………………………………8
结果……?????……………?????????????O
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附图……………………………………?????……………???………???17
附表…………………………………………………………………
讨论…?????……?………????????????…?…0
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参考文献…0
D
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综述再生因子10【的研究进展……………………………………………31
致谓}…………………??????…………………??????????……??????????45
个人简历…………………………………………………………………46
{
中文摘要
食管鳞状细胞癌患者再生因子I a表达的临床意义
摘
要
目的:食管癌是严重威胁人类健康及生命的恶性肿瘤之一。我国是食
管癌高发区,食管癌的发病率居世界第一位。目前食管癌的早期诊断水平
仍欠理想,大部分患者发现时己到中晚期。当今治疗食管癌的方法主要是
外科手术结合放、化疗的综合治疗,但食管癌治疗效果仍不理想,5年生
存率低于30%。如何早期发现食管癌,及尽早控制食管癌癌前病变的发展,
提高生存率,延长食管癌患者生存时间,一直是医疗工作者关注的课题之
一。再生因子Ia(Regeneration gene IQ,Reg Ia)属于一种钙依赖性植物血
凝素家族(c型植物血凝素家族),它是一组分泌蛋白,其功能相当于急
性反应蛋白,抗凋亡因子或胰腺p细胞和神经细胞分泌的生长因子,多种
功能与肿瘤的发生、发展、转移关系密切。本实验应用定量聚合酶链反应、
免疫组织化学和ELSIA的方法探讨RegIa在正常食管黏膜和食管鳞癌组
织中的表达差异,与临床病理学特征的关系及手术前后患者体内Reg
Ia
的表达水平的变化。意义在于研究RegIa在食管癌病人中的表达情况,探
讨其表达的临床意义。
方法:(1)食管癌组织标本共30例,来自河北省人民医院胸外科、河
北医科大学第四医院胸外科,2008年lO月-12月的食管癌手术标本(病
理证实均为鳞状细胞癌),病理诊断为正常的食管黏膜20例作为正常组
织对照,取自食管癌组织手术远端5cm。应用半定量聚合酶链反应(Reverse
transcriptase
polymemse
chain
reaction,RT—PCR)、免疫组织化学和
ELSIA的方法检测Reg 10【的表达。
应用RT—PCR的方法检测ReglamRNA的表达,首先提取食管癌和食
管正常黏膜组织的总RNA,普通琼脂糖凝胶电泳测定RNA的完整性。按
RT—PCR试剂盒说明制备cDNA,配置209lPCR反应体系,加入自lOOng
eDNA样本及合成引物进行扩增,应用凝胶成像仪上扫描记录各特异性
DNA扩增片段灰度,比较目的基因与内参基因GAPDH的扩增片段灰度,
用其比值作为mRNA表达水平的相对参数。
应用免疫组织化学的方法检测Reglot蛋白在食管癌组织中的表达;根
中文摘要
据0…一3+的评分标准:O…不显色或少于10%的肿瘤细胞浆呈现任何水
平的阳性染色;1+…一超过10%的肿瘤细胞浆呈现微弱染色,或在部分细
胞浆上染色;2+-…超过10%的肿瘤细胞浆全部弱染色;3卜…超过10%
的肿瘤细胞浆全部呈现强染色。
(2)患者血液标本来源:30例食管癌手术病人术前1天和术后7天采新
鲜血,经离心获得血清;20个健康员献血员血清作为正常对照。.
应用ELSIA方法分析食管癌患者血液中RegIa的表达,结果判断:每
个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值,按标准品浓度及吸光度做
出标准曲线,根据各待测样品吸光度在标准曲线上的位置读出相应浓度。
统计学方法:应用SPSS 1 3.0统计学软件对所有数据进行t检验、)c2检验
或秩和检验分析,计算P值,以P值<o.05判断差异有统计学意义。
结果:
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