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小麦容重QTL定位 　　摘 要： 　　为定位控制小麦容重的QTL位点，并获得与重要位点连锁的分子标记，以含有 302个家系的重组自交系群体（RIL）WL为材料，在3个环境中，用完备区间作图软件IciMapping v3.0对小麦容重QTL进行定位分析。共检测到14个控制容重的加性QTL位点，分别位于1B、2A、4A、4B、5B、6B、7A和7B染色体上，单个QTL可解释籽粒容重变异的 3.63%～16.15%。其中，QTw-WL-4A和QTw-WL-7B.2 均可在E2和平均环境中被检测到，可分别解释籽粒容重变异的4.86%、3.83%和11.81%、5.57%。其中，有4个在单个环境中可以解释超过10%的表型变异。增效位点有的来源于父本，有的来源于母本。 　　关键词：小麦；重组自交系；容重；QTL 　　中图分类号：Q343.1+7+S512.1 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2014）04-0024-05 　　小麦容重是指单位容积内小麦的重量。由于胚乳的比重大于皮层，所以小麦容重高时胚乳含量就多，皮层含量就少，出粉率就高。研究认为容重和烘烤品质呈正相关关系[1]，是反映小麦质量的重要指标，是小麦收购和市场交易的最重要指标，是定价的最主要依据。我国和美国、加拿大、澳大利亚等世界各小麦主产国的小麦质量标准中，容重都被列为质量标准的首位。容重是受多基因控制的数量性状，它是籽粒大小、质量、形状、整齐度、腹沟深浅、胚乳质地、出粉率等性状和特征的综合反映，受环境的影响较大，在早代对其进行选择的可靠性较差[2，3]。因此进行容重的QTL定位分析，对于了解容重形成的遗传基础和进行分子标记辅助选择（MAS）育种具有重要意义[4，5]。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料与田间种植 　　两个亲本潍麦8号、洛旱2号分别由潍坊市农业科学院和洛阳市农业科学研究院选育而成，由二者杂交创建的含有302个家系的重组自交系群体（RIL，F8∶9，简称WL）由国家小麦改良中心泰安分中心提供。 　　重组自交系群体及其双亲于2008-2009年度种植于山东农业大学农学院实验农场 （环境1，简称E1），2009-2010年度分别种植在山东农业大学农学院实验农场 （环境2，简称E2）和济宁市农业科学研究院试验农场（环境3，简称E3）。3个环境下均不设重复，家系间随机排列。每个家系种植2行，行长2 m，每行匀播50粒，行距30 cm，株距4 cm。栽培管理同一般大田。 　　1.2 DNA提取及分子标记检测 　　双亲及WL群体基因组DNA提取采用CTAB法（略有改动）[6]。共选用3 123对小麦基因组SSR、EST-SSR、ISSR、RAPD、STS和SRAP引物进行双亲间的多态性筛选，共筛选出343对引物，其中多位点引物有74对（53、17对和3对引物分别扩增出2、3个和4个多态性位点）。引物序列及其相关信息通过参考文献和GrainGenes2.0 网站（http：///GG2/index.shtm1）获得。所有引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。 　　扩增反应在TaKaRa PCR thermal cycler上进行，PCR反应总体积为 25 μL。反应体系的组成为：H2O 11.9 μL，10×Buffer 2.5 μL，dNTP（2.5 mmol/L）2.5 μL，Mg2+（25 mmol/L）2.0 μL，TaqE（5 U/μL）0.2 μL，正反引物（25 ng/μL）各1.7 μL（ISSR引物为3.4 μL），模板DNA（80 ng/μL）2.5 μL。扩增程序为降落PCR（Touchdown PCR），即 94℃预变性4 min，接着完成15个循环的复性温度降落程序，94℃变性45 s、65℃复性50 s（每个循环降低1℃）和72℃延伸55 s；最后完成30个循环的普通PCR程序，扩增结束后10℃保存。扩增产物按5∶1体积比加入溴酚蓝混合均匀，在6%聚丙烯酰胺非变性凝胶（39∶1）上稳压（120 V）电泳，固定、银染、显影、定影，然后用Tanon Gis-2010型凝胶成像系统照相观察，记载带型。 　　1.3 表型性状调查和分析 　　小麦完熟后单个家系所有单株混合脱粒，充分混合后用 200 mL量筒量取200 mL籽粒，称重，折算成每升重量（g）。采用SPSS 13.0 软件分别对3个环境下的表型数据进行正态分布分析。 　　1.4 遗传图谱构建和QTL分析 　　连锁图谱构建参考Wang等[7]的方法。采用MapMaker/EXP 3.0软件构图。首先，根据在GrainGenes 2.0（http：///GG2/index.shtml）公布的位点信息和中国春缺体-四体定位的信息，用“A