病毒学7病毒感染与细胞凋亡技术方案.ppt

微生物教研组 郑方亮 细胞凋亡的含义 多细胞生物的一种生理性细胞死亡的过程； 凋亡过程中，细胞的形态变化是特有的； 凋亡过程中需要基因表达和蛋白质合成，特别是酶的合成。 细胞凋亡和细胞程序性死亡 从严格的词学意义上来说，细胞程序性死亡与细胞凋亡是有很大区别的。 细胞程序性死亡的概念是个功能性概念，描述在一个多细胞生物体中某些细胞死亡是个体发育中的一个预定的，并受到严格程序控制的正常组成部分。 细胞凋亡则是一个形态学的概念，描述一件有着一整套形态学特征的与坏死完全不同的细胞死亡形式。 一般认为凋亡和程序性死亡两个概念可以交互使用，具有同等意义。 凋亡形态特征 凋亡形态特征 分子生物学机制 细胞程序性死亡是细胞之间信号传导的结果之一。环境和发育的刺激通过配体和受体之间的相互作用传递到胞内，即配体携带的信号通过与穿膜细胞受体胞外区域的结合反应到受体的胞内区域，完成信号由胞外到胞质的传递，然后开始胞内一系列蛋白质与蛋白质之间的复杂作用，最后导致凋亡的发生。 凋亡的过程 信号传递阶段 死亡信号的探测 胞外信号（配体与受体的特异结合） 胞内信号（毒素、射线引起的损伤或病毒感染） 下游死亡机制的传递 效应阶段 Caspase的激活最终造成细胞死亡。 凋亡的激活途径 Fas介导的细胞凋亡 线粒体参与的细胞凋亡 Fas介导的细胞凋亡 线粒体参与的细胞凋亡  效应阶段 吞噬 凋亡相关的基因和蛋白 细胞凋亡的调控涉及许多基因，包括一些与细胞增殖有关的原癌基因和抑癌基因。其中研究较多的有ICE、Apaf-1、Bcl-2、Fas/APO-1、c-myc、p53、ATM等。 Caspase家族 Caspase属于半胱氨酸蛋白酶，这些蛋白酶是引起细胞凋亡的关键酶，一旦被信号途径激活，能将细胞内的蛋白质降解，使细胞不可逆的走向死亡。它们均有以下特点：①活性中心富含半胱氨酸；②对底物天冬氨酸部位有特异水解作用，所以命名为caspase（ cysteine-containing aspartate-spicific protease ），方便起见本文称之为凋亡酶；③都是由两大、两小亚基组成的异四聚体，大、小亚基由同一基因编码，前体被切割后产生两个活性亚基。 分为两类：一类为执行者（executioner或effector），如caspase-3、6、7，它们可直接降解胞内的结构蛋白和功能蛋白，引起凋亡，但不能通过自催化（autocatalytic）或自剪接的方式激活；另一类为启动者（initiator），如caspase-8、9，收到信号后，能通过自剪接而激活，然后引起caspase级联反应，如caspase-8可依次激活caspase-3、6、7 Apaf-1 Apaf-1被称为凋亡酶激活因子-1（apoptotic protease activating factor-1），在线粒体参与的凋亡途径中具有重要作用，该基因敲除后，小鼠神经细胞过多，脑畸形发育。Apaf-1含有3个不同的结构域：①CARD（caspase recruitment domain）结构域，能召集caspase-9；②ced-4 同源结构域，能结合ATP/dATP；③C端结构域，含有色氨酸/天冬氨酸重复序列，当细胞色素c结合到这一区域后，能引起Apaf-1多聚化而激活。Apaf-1具有激活Caspase-3的作用，而这一过程又需要细胞色素c和caspase-9参与。Apaf-1/细胞色素c复合体与ATP/dATP结合后，Apaf-1就可以通过其CARD结构域召集caspase-9，形成凋亡体（apoptosome），激活caspase-3，启动caspase级联反应。 Bcl-2家族 Bcl-2为凋亡抑制基因，是膜的整合蛋白。它们在线粒体参与的凋亡途径中起调控作用，能控制线粒体中细胞色素c等凋亡因子的释放。 Bcl-2家族成员都含有1-4个Bcl-2同源结构域（BH1-4），并且通常有一个羧端跨膜结构域(transmembrane region ,TM)。其中BH4是抗凋亡蛋白所特有的结构域，BH3是与促进凋亡有关的结构域。根据功能和结构可将Bcl-2基因家族分为两类，一类是抗凋亡的（anti-apoptotic），如：Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w、Mcl-1；一类是促进凋亡的（pro-apoptotic），如：Bax、Bak、Bad、Bid、Bim，在促凋亡蛋白中还有一类仅含BH3结构，如Bi