培训课件--细胞工程与干细胞.ppt

干细胞研究成为继人类基因组大规模测序之后最具活力、最有影响和最有应用前景的生命学科研究领域，1999年干细胞研究被美国《科学》杂志评为1999年度世界十大科学之冠，2000年干细胞研究再次被《科学》杂志评为该年度世界十大科学成就之一。 组织工程是以干细胞研究为基础发展起来，它有望解决临床上急需的人工组织与器官问题，进展极为迅速，已经成为干细胞应用的主要方向。 干细胞有几个主要特征 干细胞本身不是终末分化细胞； 干细胞能无限增殖分裂； 干细胞可连续分裂几代，也可在较长时间内处于静止 状态； 干细胞分裂产生的子细胞只能有两种命运——保持为干细胞 或分化为特定细胞。 二、干细胞的分类 按分化潜能大小来分类: 全能干细胞（ Totipotent stem cell ）： 它具有形成完整个体的分化潜能。如受精卵，胚胎干细胞。 多能干细胞（ pluripotent stem cell ），具有分化出多种组织细胞的潜能，但却失去了发育成完整个体的能力，发育潜能受到一定的限制。如骨髓多能造血干细胞是典型的例子，它可分化出至少十二种血细胞 。 专能干细胞（ multipotent stem cell ），这类干细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化，如上皮组织基底层干细胞、肌肉中的成肌细胞等。 根据来源来分: 来源于胚胎--- 胚胎干细胞 ESC （Embryonic Stem Cell ） 胚胎性生殖细胞 EGC （Embryonic Germ Cell ） 来源于成体--- 成体组织来源的干细胞 ASC （Adult-derived Stem Cell ） 根据干细胞组织发生的名称进行分类: 胎胎干细胞 造血干细胞 骨髓间质干细胞 肌肉干细胞 成骨干细胞 内胚层干细胞 视网膜干细胞 胰腺干细胞 （一）胚胎干细胞 当受精卵分裂发育成囊胚时，内层细胞团（Inner Cell Mass）的细胞即为胚胎干细胞(ES cell)。胚胎干细胞具有全能性，可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。 1.胚胎干细胞概念 人类胚胎干细胞 2.胚胎干细胞的特性 1）胚胎干细胞来源于胚胎早期的胚泡中的内细胞群，保持未分化状态，具有自我复制的能力，具有向胚胎三个胚层来源的所有细胞分化的潜能。 2）胚胎干细胞可通过单细胞克隆建立有相同遗传特性的胚胎干细胞系。建立的胚胎干细胞系有与亲代细胞相同的特征 3) 胚胎干细胞具有正常、完整（双倍体）及稳定的染色体核型。 4)胚胎干细胞缺乏细胞周期中G1期的限（chechpoint），胚胎干细胞大部分时间都处于细胞周期的S期，在此期进行DNA合成。胚胎干细胞不需外源信号刺激启动DNA的复制。5）胚胎干细胞表达三种特异性标志分子：细胞内的转录因子（intrinsic transcription factor， Oct4）、白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF）和碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，AP）。 6）雌性哺乳动物来源的胚胎干细胞内，不存在X染色体失活现象。 7）胚胎干细胞端粒酶活性呈阳性，具有维持端粒长度，保持干细胞增殖能力的重要作用。 8）胚胎干细胞裸鼠皮下或肾包囊接种，可形成畸胎瘤。 3.胚胎干细胞的应用 1）基因功能的研究； 2）发育机制的研究； 3）药物检测； 4）细胞替代疗法和组织器官移植。 （二）成体干细胞（Adult stem cell） 成体干细胞是在成体组织内具有自我更新能力并能分化产生一种或一种以上子代组织细胞的未成熟细胞。 1.成体干细胞概念 2.成体干细胞的特点 数量少，难以识别，分离纯化； 体外培养时不能长时间增值； 具有可塑性※（神经干细胞－造血干细胞）； 在完全分化前经历一个中间类型即祖细胞阶段。 可塑性（plasticity）造血干细胞、骨髓间充质干细胞、神经干细胞等成体干细胞具有一定跨系 、甚至跨胚层分化的特性，称其为干细胞的“可塑性”。 造血干细胞 间充质干细胞 精原干细胞 神经干细胞 表皮干细胞 肠干细胞 肝干细胞 3.成体干细胞种类 造血干细胞 （Hematopoietic stem cell，HSCs） 造血干细胞是从血液、骨髓、胶带血来源一群原始造血细胞，能自我更新、能分化成一些具有组织特化的细胞、能从骨髓中游离出来进入血液循环、能发生程序性死亡的细胞。 三个部位生产/储存造血干细胞 大部分在骨髓里，即骨髓造血干细胞。 在外周血液中，即血管中