外植体和植物生长调节剂对盾叶薯蓣愈伤组织诱导的影响.docVIP

外植体和植物生长调节剂对盾叶薯蓣愈伤组织诱导的影响 　　摘要：以盾叶薯蓣（Dioscorea zingiberensis C. H. Wright）茎段和叶片为外植体，研究了不同植物生长调节剂对盾叶薯蓣愈伤组织诱导的影响。结果表明，茎段作外植体更有利于盾叶薯蓣愈伤组织的诱导，最佳的愈伤组织诱导培养基为MS+1.5 mg/L 2，4-D+1.0 mg/L 6-BA，诱导30 d时愈伤组织诱导率达100%，愈伤组织为浅黄色、质地疏松、颗粒状；以叶片为外植体，愈伤组织诱导培养基中添加1.0 mg/L 2，4-D+0.5 mg/L 6-BA时诱导率最高，为93.75%。盾叶薯蓣愈伤组织的生长曲线呈“S”型，0～12 d为延迟生长期，增重缓慢；12～30 d为指数生长期，生长旺盛，增殖迅速；30～36 d为缓慢生长期，因此诱导的愈伤组织需在接种后30 d内继代培养。 　　关键词：盾叶薯蓣（Dioscorea zingiberensis C. H. Wright）；外植体；植物生长调节剂；愈伤组织 　　中图分类号：S632.1；S339.4+1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）15-3693-04 　　盾叶薯蓣（Dioscorea zingiberensis C. H. Wright）是薯蓣科薯蓣属多年生缠绕草本植物，又名黄姜，火头根等，为中国特有种[1]，主要分布于四川、湖北、湖南、云南和陕西等地[2]，其根茎富含的薯蓣皂素是合成甾体激素和甾体避孕药的主要原料[3]，可用于治疗冠心病和心血管病，也可用于抗癌、防衰老、避孕和治疗多种疾病，还是灭杀钉螺、防治血吸虫的理想药物，在医药界有“药用黄金”的美称。由于早些年只采不栽，已使盾叶薯蓣野生资源面临枯竭[4]。合理开发利用盾叶薯蓣资源，改变其资源短缺的局面十分迫切。盾叶薯蓣的人工栽培虽缓解了薯蓣皂素生产中原料不足的矛盾，但普遍存在薯蓣皂素含量低和种质退化的问题[5]。因此，选育薯蓣皂素含量高的盾叶薯蓣优良单株，并建立高效的快速繁殖体系在盾叶薯蓣商业化栽培中具有重要意义。随着生物技术的发展，利用组织培养技术对药用植物进行品种的改良及快速繁殖，可以更加方便、快捷和大量地得到有效成分含量较高的植株，具有广泛的应用前景。本研究以盾叶薯蓣试管苗的茎段和叶片为外植体，研究了不同植物生长调节剂种类和浓度组合对愈伤组织诱导的影响，并绘制愈伤组织的生长曲线，以期为盾叶薯蓣优良高产无性系的筛选奠定基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　盾叶薯蓣试管苗来自河南师范大学“四大怀药”组织培养研究室。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 愈伤组的诱导 在超净工作台上将试管苗叶片切成面积约0.5 cm×0.5 cm的小块，茎段切成长1.5 cm左右的小段，分别接种到愈伤组织诱导培养基中。愈伤组织诱导培养基以MS为基本培养基，含3%的蔗糖和0.6%的冷凝脂，调pH为6.0，121 ℃灭菌20 min，分别添加不同的植物生长调节剂组合2，4-D（0.5、1.0、1.5 mg/L）+6-BA（0.5、1.0 mg/L）或NAA（0.5、1.0、1.5 mg/L）+6-BA（0.5、1.0 mg/L）。培养条件为培养温度（25±2） ℃、光照度2 000 lx、光照时间14 h/d。观察愈伤组织的生长情况，30 d时统计并记录愈伤组织诱导率、愈伤组织量和愈伤组织生长情况。 　　愈伤组织诱导率=形成愈伤组织的外植体个数/接种的外植体总数×100%。 　　1.2.2 愈伤组织的继代培养及生长曲线的绘制 将诱导形成的愈伤组织转入筛选出的最佳诱导培养基中进行继代培养，每瓶接种3.0 g。接种后每3天取样1次，每次随机选取3瓶材料，称其鲜重，取平均值，以愈伤组织增重量（g/L）为纵坐标、培养时间（d）为横坐标绘制愈伤组织的生长曲线。 　　愈伤组织增重量（g/L）=收获量（g/L）-接种量（g/L） 　　2 结果与分析 　　2.1 植物生长调节剂对茎段外植体愈伤组织诱导的影响 　　以长1.5 cm左右的茎段作外植体，分别接种在含不同植物生长调节剂浓度组合的愈伤组织诱导培养基上，接种后8 d茎段两端出现膨大迹象，部分茎段从中央开始膨大；11 d后从膨大处诱导出白色、颗粒状的愈伤组织（图1A）；随培养时间的延长，愈伤组织的量也逐渐增多，逐渐覆盖住整个茎段，愈伤组织颜色和质地也有变化（图1B）。30 d时盾叶薯蓣茎段外植体愈伤组织的诱导情况见表1。从表1可以看出，6-BA浓度相同时愈伤组织诱导率随2，4-D浓度的升高呈升高趋势，而2，4-D或NAA浓度相同时愈伤组织诱导率随6-BA浓度的升高总体呈升高趋势。其他条件相同时，添加NAA与6-BA的培养基中愈伤组织的诱导率和愈伤组织量