第四章细菌感染的检查方法与防治原则.pptVIP

小结 细菌分离鉴定的程序 细菌的人工培养 * * 第四章 细菌感染的实验室诊断 与防治原则 病原菌检测 血清学诊断 第一节 细菌感染的实验室诊断 采取标本应无菌操作； 不同情况（如病期、分布、排出部位等）采不 同标本。并尽可能采集病变明显部位的材料； 采集标本应在使用抗生素之前； 标本必须新鲜，尽快送检，注意冷藏（少数应 保暖）； 测抗体时尽量采集双份血清：急性期、恢复期。 一、标本采集与送检的原则 病原菌检测 病原菌的检测程序 病原菌检测 标本 直接涂片镜检 （检测细菌形态特征） 分离培养 生化试验 血清学试验 动物试验 明确诊断 药物敏感试验 检测抗原 检测核酸 形态结构检查 显微镜放大法 染色法 普通光学显微镜 电子显微镜 复染色法：用2种以上染料 革兰染色 抗酸染色 负染色法：墨汁负染 荧光显微镜 （掌握－实验课） 细菌的人工培养 培养基 细菌在培养基中的生长情况 培养基 cultrue medium 用人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。 常用培养基种类 1、按物理性状分： 液体培养基 + 1.5-2.5%琼脂 固体培养基 + 0.3-0.5%琼脂 半固体培养基 2、按营养组成和用途分 厌氧培养基 基础培养基 营养培养基 选择培养基 鉴别培养基 +血液、血清、 生长因子等 +化学物质，抑制某些细菌、 利于另外一些细菌生长， 如：SS培养基 利用生化反应鉴别细菌， 如：葡萄糖、乳糖等 固体培养基中细菌的生长情况 菌落（S型） 菌苔 菌落（R型） 菌落（colony）： 单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团。 液体培养基中细菌的生长情况 混浊、沉淀、菌膜 沉淀生长 混浊生长 表面生长 半固体体培养基中 云雾状生长 沿穿刺线生长 有鞭毛 细菌 无鞭毛 细菌 （二）细菌的鉴定 1. 形态学鉴定： 2. 生化试验鉴定：对糖和蛋白质的分解，检测 肠道菌 3. 血清学鉴定：已知抗体检测未知的纯培养菌　　 4. 动物试验：测定细菌毒力 病原菌检测 （掌握－实验课） （三）细菌抗原的检测 EIA, IF, ELISA, Western blot, 对流免疫电泳 （四）检测细菌核酸 核酸杂交 PCR 基因芯片（gene chips） 病原菌检测 用已知细菌或特异性抗原检测血清中的有无 相应特异性抗体及其动态学变化。 　　　　适用于抗原性较强的细菌或病程较长的感染 性疾病的诊断。 　　　　若恢复期或一周后血清抗体效价比早期升高 4倍或4倍以上，有诊断意义。 血清学诊断 第二节 细菌感染的防治原则 一、人工主动免疫：主要用于预防 （一）疫苗 　　第一代：死疫苗，减毒活疫苗 　 第二代：亚单位疫苗、基因工程疫苗 第三代：重组载体疫苗、核酸疫苗等 （二）类毒素 　　　 死疫苗与活疫苗的比较 种类 活疫苗 死疫苗 制备特点 减毒或无毒 死菌，保持免疫原性 制备方法 非正常培养 理化方法 接种次数 1次，量小，可在体内增殖，类似轻型感染或隐性感染 2-3次，量大，在体内不增殖，发热或局部肿痛反应等 免疫类型 体液免疫，细胞免疫 体液免疫 免疫效果 好，维持时间长（1-5年） 较差，维持时间短（0.5-1年） 安全性 保存 可能毒力回复 不易保存 好 易保存 人工主动免疫 （二）类毒素 (toxoid) 外毒素经0.3%-0.4%甲醛处理 失去毒性，保留抗原性 精制抗毒素：加入佐剂，延缓吸收，几次机体产生抗体 联合疫苗：如百白破三联疫苗 　 二、人工被动免疫：主要用于紧急预防和治疗 抗毒素（含抗体的免疫血清） 血清丙种球蛋白 其他免疫制剂：IFN-γ，CSF等。 第二节 细菌感染的防治原则 种类： 抗毒素（含抗体的免疫血清） 类毒素/外毒素免疫产生 用