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肝癌癌前病变相关癌基因及抑癌基因研究摘要:目的 本文研究了肝癌癌前病变的相关癌基因,对这些基因的子区域甲基化状态的基因异常表达进行了分析,并研究了抑癌基因在肝癌癌变中的作用,希望对治疗肝癌有所帮助。方法 本文应用了甲基化基因聚合酶反应技术,并对多项肝癌组织进行了实验,与正常肝细胞进行了对比,分析了抑癌基因在子区域中的甲基化表达,在分析这项病历时,研究人员还参照了相关临床病理资料,希望可以使研究的结果更加准确、可靠。结果 通过实验发现,GSTP1在肝癌癌细胞中、癌旁肝组织中以及正常肝细胞中,甲基化率分别是57.1%、37.1%、0%,p16在三种肝细胞中甲基化率是54.3%、37.1%、0%,RIZI的甲基化率分别是68.6%、14.3%、0%,RASSFIA的甲基化率分别是88.6%、74.3%、10%。从这几组数据中可以看出,GSTP1与RIZI的甲基化率均高于癌旁组织以及正常肝组织,其他两种基因的甲基化率也高于正常肝组织。所以,这四种基因对肝癌癌前病变研究有着重要的意义。结论 GSTP1与RIZI有着明显的甲基化异性,其可作为肝癌早期诊断的重要标记物。P16的甲基化出现失活现象主要是由HBV感染导致的,GSTP1出现甲基化可能是由于肝细胞癌遇到侵袭或者干扰。关键词:肝癌;癌细胞;病变;基因;抑癌基因;甲基化肝癌是一种较难治愈的恶性肿瘤,出现这种病一般病变比较快,患者可能会在短期内死亡。为了更好的治疗这种病,研究人员不断的研究肝癌抑制基因,并利用甲基化结合蛋白的方式,对肝癌病变相关细胞的染色质结构进行破坏与重组,并抑制基因的转录,研究后发现,肝癌癌前病变的相关基因并未出现变化,而且肿瘤抑制基因的甲基化与肝癌的发展有着一定联系。本文利用甲基化特异性聚合酶链技术,对35例肝癌细胞、癌旁组织以及正常肝细胞作为对比,并对四种抑癌基因的甲基化表达进行了分析与记录,这四种基因分别是GSTP1、P16、RIZI以及RASSFIA,经过研究发现,这四种基因对抑制肝癌癌细胞变异以及恶化有着重要的作用。1资料与方法1.1一般资料1.1.1标本收集 为了更好的分析肝癌癌细胞病变病理,笔者参考了某医院真实的病例,对35例肝癌患者接受治疗的过程进行了分析与研究,这些患者在手术前都没有进行过任何抗病治疗,而且也没有任何并发症。这35例肝癌患者包括27例男性与8例女性,年龄在37~82岁,在诊断的过程中发现,这些患者中,肿瘤细胞直径5 cm是有16例;肿瘤外膜包裹完整的是15例,包膜遭到侵犯的患者是20例;术前甲胎蛋白AFP阳性的是22例,甲胎蛋白AFP是阴性的有13例。为了更好的研究出病变基因以及抑癌基因,本实验选取了20例肝脏组织作为对照。1.1.2试剂与仪器 在研究这些肝癌癌前病变基因时,需要用到多种试剂与仪器,比如DNA抽提试剂盒,甲基化修饰盒、纯化试剂、DNA引物、PCR扩增仪、凝胶成像系统等等。1.2方法1.2.1 DNA提取 DNA提取是研究肝癌癌基因的一项重要步骤,在提取的过程中,需要严格按照提取试剂盒中的要求进行操作,如果出现不规范操作等行为,可能会直接影响实验结果的准确性,所以,相关人员一定要严谨、认真,还要利用紫外光光度计测量提取物的浓度以及纯度,测量完成后,要将符合要求的DNA放置在-80℃的温度下保存,以待使用。1.2.2甲基化修饰与纯化 DNA甲基化的修饰与纯化主要是利用亚硫酸氢盐,在操作的过程中也要参考修饰以及纯化试剂盒中的相关要求,经过修饰后的基因序列一般不会出现变化,而没有发生甲基化是DNA在修饰后序列会出现明显变化,所以,在研究肝癌癌前病变相关癌基因以及抑癌基因时,可根据修饰后基因中的DNA序列进行判断,这主要是利用了甲基化特性性PCR扩增的原理,通过分析基因的甲基化状态,就可以轻易的判断出肝癌细胞的癌前病变情况。1.2.3结果判定 在分析肝癌细胞时,如果发现甲基化出现扩增等现象,则可判定该组织的甲基化呈阳性,如果甲基化与非甲基化的引物都出现了扩增条带,则该组织的部分是属于甲基化,可以表示为甲基化阳性。1.3统计学方法 统计学分析是该实验中重要的分析指标,其对实验结果的分析与对比,有着重要的比照作用。在肝癌组织中,采用甲基化方法,可以有效的对比出肝癌细胞、癌旁细胞以及正常肝细胞中不同基因的含量以及变化情况,通过概率法可以认为,P0.05则说明该差异不具统计学意义。2结果2.1肝癌细胞、癌旁细胞以及正常肝细胞中抑癌基因的变化 经过研究发现,GSTP1基因在肝癌细胞、癌旁细胞以及正常肝细胞中的甲基化率有着明显的差异,其具体数据分别是57.1%、25.7%、0%;p16基因在三种不同的细胞中含量也有较大的差异,分别是54.3%、37.1、0%,通过分析分析发现,前者的差距具有统计学意义,后者不具统计学意义。2.2甲基化与临床
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