瑞安市零售水产品中副溶血性弧菌的血清分型鉴定.docVIP

瑞安市零售水产品中副溶血性弧菌的血清分型鉴定 　　【摘 要】目的：了解瑞安市零售水产品中副溶血性弧菌的污染、血清群分布情况，为防治副溶血性弧菌引起的食源性疾病提供科学依据。方法：参照GB/T 4789.7-2008，用标准血清进行分型以及神奈川实验检查其溶血素。结果：采集99份海水产品共检出副溶血性弧菌59株，检出率为59.60%。不同样品种类检出率 贝壳类29件检出20株，检出率为68.97%；鱼类52件检出26株，检出率为50.00%；虾蟹类12件检出8株，检出率为66.67%；海藻类6件检出5株，检出率为83.33%。结论：瑞安市零售水产品副溶血性弧菌污染较严重，主要以O1群为主，并且不同种类间无显著性差异（χ2=4.691，P0.05）。神奈川实验阳性率高达77.97%。 　　【中图分类号】R55 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2013）05-0886-01 　　副溶血性弧菌（Vibrio Parahemolyticus，VP）是一种嗜盐性弧菌。常存在于近海岸海水、海产品及盐渍食品中。它是我国沿海地区最常见的食物中毒病原菌。[1]目前副溶血性弧菌引起的食物中毒在细菌性食物中毒中的比例有明显的上升趋势，浙江省副溶血性弧菌食物中毒的发生率占细菌性食物中毒的60%左右，已成为我省食物中毒的首要病原菌。[2]为了了解瑞安市零售海水产品中副溶血性弧菌的污染情况，于2012年6月采集了99份海水产品进行了副溶血性弧菌检测，对分离的副溶血性弧菌进行了血清分群。 　　1 材料与方法 　　样品来源 随机选择瑞安市3家农贸市场作为采样地点，共采集99份样品。 　　1.2 培养基和试剂 　　1.2.1 主要试剂 TCBS、3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂、3%氯化钠三糖铁琼脂、0%～10%氯化钠胰胨水、我妻氏琼脂等由北京陆桥技术有限公司生产；碱性蛋白胨水由杭州微生物试剂有限公司生产。弧菌显色培养基由法国科玛嘉公司生产；API 20E、氧化酶试剂由法国生物梅里埃公司生产。副溶血性弧菌诊断血清为日本生研株式会社DENKA产品。所有培养基及试剂条都在有效期间内使用。 　　1.2.2 仪器 ATB自动细菌鉴定仪购自法国生物梅里埃公司。 　　1.3检验方法 　　1.3.1 样品检测 副溶血性弧菌检测按GB/T 4789.7-2008[3] 规定进行检测。无菌操作取鱼（腮、腹部或肠）、虾（头、腹部）、贝壳类（软组织）、蟹（腮、肠）25g，加入225ml灭菌3%氯化钠碱性蛋白胨水中，用拍击式均质器拍击2min，制成1：10的均匀稀释液。将该稀释液于36℃培养18h。增菌液接种于TCBS平板和科玛嘉弧菌显色培养基在36℃培养24h，挑取三个或以上可疑菌落，穿刺接种3%氯化钠三糖铁琼脂斜面并划线3%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板进行纯培养，于36℃培养24h。挑选纯培养的单个菌落进行氧化酶实验、革兰氏染色及嗜盐性试验。阳性菌株再做进一步生化试验并用API 20E生化试剂鉴定确定。 　　1.3.2 血清学分型[3] 将阳性菌株接种3%氯化钠胰蛋白大豆琼脂试管斜面，36℃培养24h。用含3%氯化钠的5%甘油溶液冲洗3%氯化钠胰蛋白大豆琼脂斜面培养物，获得浓厚的菌悬液。将该菌悬液121℃灭菌2h，离心去K抗原，取沉淀物以玻片法做O抗原分型。阳性凝集反应可以立即观察。如果未见到与O群血清凝集，则为阴性，该培养物的O抗原属于未知。 　　1.3.3 神奈川试验[3] 用接种环将测试菌株的3%氯化钠胰蛋白大豆琼脂18h培养物点钟表面干燥的我妻氏血琼脂平板。36℃培养24h，并立即观察。阳性菌株结果为菌落周围呈半透明环的β溶血。 　　2 结果 　　2.1 检出率 　　99件水产品中共检出副溶血性弧菌59株，检出率为59.60%。高于徐景野[4]等报告（41.4%）。不同样品种类检出率 贝壳类29件检出20株，检出率为68.97%；鱼类52件检出26株，检出率为50.00%；虾蟹类12件检出8株，检出率为66.67%；海藻类6件检出5株，检出率为83.33%。见表1。不同种类间无显著性差异（χ2=4.691，P0.05）。 　　2.2 血清分型结果 　　将59株副溶血性弧菌进行分型，结果分布9个O抗原群，分别为O1群占20.33%（12/59）、O2群占6.78%（4/59）、O3群占16.95%（10/59）O4群占5.08%（3/59）、O5群占15.25%（9/59）、O7群占1.69%（1/59）、O8群占6.78%（4/59）、O10群占11.86%（7/59）、O11群占10.17%（6/59）、O1～O11都不凝集占5.08%（3/59）。 　　2.3 神奈川试验 　　59株副溶血性弧菌检出46株为神奈川试