【创新设计】高中生物苏教版选修一 4.2 分子生物学技术 规范训练.docVIP

第二节 分子生物学技术 (时间：30分钟　满分：50分)考查知识点及角度 难度及题号 基础 中档 稍难 PCR技术的原理 2、4 技术的过程 1、3 5 技术的应用 6 7 8 一、选择题(共5小题，每小题4分，共20分) 下列有关PCR技术的叙述，不正确的是(　　)。 技术经过变性、退火、延伸3个阶段 技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等 技术需在体内进行 技术利用碱基互补配对的原则 解析　PCR一般要经历30多次循环，每次循环可以分为变性、退火和延伸三步。PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等。PCR技术是在体外进行的。 答案　C 技术是现代分子生物学实验工作的基本方法之一，区别于细胞DNA复制，它利用的原理是(　　)。 的半保留复制 B．碱基互补配对 转录和翻译 D．DNA热变性原理 解析　在80～100 ℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解旋，双链分开，这个过程称为变性。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚和结合。 答案　D 3标准的PCR过程一般分为变性、退火、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是(　　)。 、56 ℃、72 ℃ B．72 ℃、56 ℃、94 ℃ 、94 ℃、72 ℃ D．80 ℃、56 ℃、72 ℃ 解析　当温度上升到90 ℃(90～96 ℃)以上时，双链DNA解聚为单链，称之为变性；当温度下降到50 ℃(～60 ℃)左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合；当温度上升到72 ℃(70～75 ℃)时，溶液中Taq聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，称为延伸。 答案　A 变性作用是指核酸双螺旋结构被破坏，双链解开，但共价键并未断裂。引起变性的因素很多，升高温度、过酸、过碱、纯水以及加入变性剂等都能造成核酸变性。PCR的反应过程中，引起变性的因素是(　　)。 过高 B．pH过低 升高温度 D．加入酒精 解析　各选项的条件均能导致DNA分子变性，但在PCR反应中，变性后DNA扩增不能进行，因此，在PCR反应中，选用升高温度使DNA变性。 答案　C 下列关于PCR引物的说法中，不正确的是(　　)。 引物是PCR过程中与模板DNA部分序列互补，并能引导模板DNA的互补链合成的脱氧核苷酸序列 引物常根据需要扩增的目标DNA的碱基序列用化学合成的方法获得 聚合酶只能使DNA链从引物的3′端开始向引物的5 D．引物的3′端必须具有游离的—OH基团 解析　在DNA分子扩增时，DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只有从3′端延伸DNA链，因此需要引物。当引物与DNA母链结合后，DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA了。 答案　C 二、非选择题(共30分) (8分)PCR技术是一种DNA体外扩 增技术。1988年，PCR仪问世DNA序列测定。右图所示是PCR技术示意图。 请回答下列问题。 (1)引物是此过程中必须加入的物质，从化学本质上说，引物是一小段________。 (2)将双链DNA________，使之变性，从而导致________。 (3)引物延伸需提供________作为原料。 解析　(1)引物是一小段单链DNA或RNA。(2)DNA变性的温度是94 ℃，使双链DNA分离成两条单链。(3)DNA扩增的原料是四种 答案　(1)单链DNA或RNA　(2)加热到94 ℃　双链　DNA分离成两条单链　(3)四种脱氧核苷酸 (11分)用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。 PCR反应体系的配方 缓冲液 5 μL 脱氧核苷酸 1 μL A 0.5 μL 引物B 0.5 μL 聚合酶 0.5 U 模板DNA 1～2 μL 加去离子水至50 μL 表1 反应条件 温度 时间 变性 95 ℃ 30 s 退火 55 ℃ 30 s 延伸 72 ℃ 1 min 次循环后 适宜 5～10 min 保温 4 ℃ 2 h 表2 (1)请指出DNA分子在体内复制所需的条件是：____、________、________和________。PCR反应中，条件下变性30 s的目的是：________。 (2)假设一个模板DNA分子中有800个碱基对，其中含有腺嘌呤600个，若通过PCR技术共消耗周围环境中游离的胞嘧啶脱氧核苷酸6 200个，则该模板DNA在PCR扩增仪中已经复制了________次。 (3)请指出PCR技术与转录过程的三个不同之处： _。 。 。 解析　根据DNA半保留复制的特点，已知A＝600个，可知C＝G＝200个，即复制n次需C＝(2