第四章 胚胎移植【参考】.pptVIP

绵羊桑椹胚 一般来说，在进行胚胎检查等操作时，室温一般不应低于25℃，最好能保持在37℃。 经质量检查后的胚胎可装入移植管内立即进行鲜胚移植，也可进行冷冻长期保存。 六.受体的同期发情 对母畜进行同期发情一般采取两种手段： 一种是延长黄体期：最常用的方法是进行孕激素处理。常用的有孕酮、甲孕酮、甲地孕酮、炔诺酮、氯地孕酮等。处理方法是皮下埋植、阴道栓、口服和肌肉注射等。 另一种方法是缩短黄体期的方法有①注射促性腺激素②注射促性腺激素释放激素③注射前列腺素等。 同期发情的方法 1.孕激素阴道栓法 孕激素可通过口服、注射、皮下埋植和阴道放置孕激素缓慢释放装置等方法。皮下埋植或阴道放置缓慢释放装置使用方便易行、效果可靠、成本低廉，尤其是阴道栓法。 2.前列腺素及其类似物处理法 对有功能性黄体的母畜于注射后48?96h内发情：一次PG法、二次PG法 七．胚胎移植方法 1．手术法 适合小动物。 2．非手术法 适合大家畜。 移植方法分类 动物的全身麻醉： 1小白鼠 戊巴比妥钠法，以PBS把戊巴比妥钠以2mg/ml。按体重0.1ml/10mg腹腔注射。 2兔 体重在3Kg以上的成年家兔，用戊巴比妥钠以50mg/kg耳静脉注射。 3羊 用40mg水合氯醛溶于100ml蒸馏水灭菌后，作颈静脉注射（体重40kg以上）。 4猪 耳静脉注射1g苏里塔尔钠（surital sodium）或戊硫代巴比妥酸钠（thiopental sodium）。母猪背朝下放在手术台上，自鼻孔插入麻醉导管，以便吸入O2与麻醉剂（氟烷（halothane）或二氟二氯乙基甲醚。 小鼠胚胎移植法 1、假孕受体的准备 进行小鼠胚胎移植之前应该先准备好假孕受体。假孕受体是由结扎公鼠与雌鼠交配，见到阴道栓雌鼠。 1）? 公鼠输精管的结扎 合适的公鼠龄在6周以上。 操作程序 ①???? 麻醉 称重、麻醉 ②???? 腹部消毒 用70％的酒精消毒手术部位 ③???? 剪毛 如鼠毛过多，可沿腹中线剪毛。 ④???? 切开皮肤 用钝镊子夹起皮肤，使之离开腹壁，沿腹中线适当位置开口。注意要保持剪刀向上抬起。 ⑤???? 切开体壁 用小镊子夹住体壁使之离开肠管，再用眼科剪刀再腹中线剪开1厘米长的切口。不能伤及肠管。 ⑥???? 找到睾丸的白色脂肪垫（体） 把一侧的睾丸从阴囊推入腹腔，用小镊子夹住腹壁切开一缘，找到附于睾丸的白色脂肪垫 ⑦取出睾丸 用钝镊子夹住脂肪体，将其轻轻拉出，随之睾丸和输精管也被拉出。因睾丸表面光滑，只能通过操作脂肪体来移动和定位。 ⑧???? 结扎输精管 辨认附睾，将附睾下方的输精管夹起。用缝合线穿过结扎。结扎两端后从中间剪断。也可以用灼热的镊子将输精管完全断开。或者剪断一段输精管。 ⑨???? 复位 结扎后，拉动脂肪体，使之睾丸和输精管回到腹腔。结扎另外一侧输精管。 ⑩ 缝合和术后处理 手术法缝合刀口。撒适量抗生素。提高环境温度术后1－2周后才能使用。 2假孕母鼠准备 手术后的公鼠与母鼠合笼。验证其不育后，在根据其所移植的胚胎时期，准备适当的受体母鼠。 小鼠胚胎的子宫移植 用于移植桑椹胚和囊胚。 1）暴露子宫 ①???? 麻醉、消毒 根据体重，注射适当的麻醉药。待动物进入麻醉状态后，用70％酒精在其背部消毒，如毛太长就先剪毛。 ②???? 切开皮肤 在鼠背部近中线处，在最后肋骨水平，切开长约一厘米的纵向口。再用70%酒精擦拭开口，除去带入的毛。 ③???? 打开体壁 拉动皮肤开口，可见其下的白色脂肪体。用小剪子在脂肪体上方开口。开口时，注意不要伤及较大的静脉。 ④???? 拉出子宫 用钝镊子夹住脂肪体，从切口拉出。卵巢、输卵管、子宫被相继拉出，使卵巢和输卵管留在外面。并小心移入实体镜下。  2）? 准备胚胎移植 准备好移植的胚胎、制作移卵管、吸入胚胎、移卵管的固定。 3）? 胚胎移植 ①???? 在子宫适当位置扎1小孔。用钝镊子夹住子宫上端，用缝合针或者针头在子宫下部扎1小孔。保证针孔进入子宫腔，可以轻轻抽出。 ②???? 移入胚胎。将移卵针沿小孔轻轻插入5mm深，轻轻吹细管，将胚胎吹入子宫。 ③???? 子宫复位、缝合 用镊子夹住脂肪体将子宫、卵巢、输卵管推回腹腔、缝合。 （三）家畜的胚胎移植 1非手术法 大家畜牛、马。 1）将鉴定后的胚胎装入细管 2） 将细管装入移植枪 山羊的胚胎移植 移植方法（手术法） 将母羊仰卧保定，在乳房一侧切开腹壁，将子宫角和输卵管拉出于切口外，如果是从供体输卵管得到的胚胎，将装有胚胎的细吸管插入受体羊输卵管伞口内，缓缓注入到输卵管内。 如果是从供体羊子宫角尖端取得的胚胎，需用—个钝针头在距子宫角尖端1~2厘米处刺一小洞，然后用注射器连接装有胚胎的细导管或