研究非酒精性脂肪性肝病患者肠粘膜组织紧密连接蛋ZO-1,Occludin表达的变化.docVIP

目的：研究非酒精性脂肪性肝病患者肠粘膜组织紧密连接蛋ZO-1,Occludin表达的变化。 方法：收集正常人、非酒精性脂肪性肝病患者的肠粘膜组织共90例，其中正常对照组30例，单纯性脂肪肝组30例，非酒精性脂肪性肝炎组30例，采用免疫组化方法测定各组紧密连接蛋白ZO-1，Occludin的表达，荧光定量PCR 检测各组ZO-1，Occludin的mRNA 的表达水平。 结果：免疫组化结果： (1)ZO-1，正常对照组与单纯性脂肪肝组比无统计学意义（P0.05）。单纯性脂肪肝组与非酒精性脂肪性肝炎组比有统计学意义（P=0.002），对照组与非酒精性脂肪性肝炎组比（P=0.002）。 Occludin单纯性脂肪肝组与对照组比虽然阳性率有所降低但无统计学意义（P0.05）。单纯性脂肪肝组与非酒精性脂肪性肝炎组比（P=0.009），对照组与非酒精性脂肪性肝炎组比（P=0.004）。 荧光定量PCR结果: mRNA的相对表达量在对照组（1.143± 0.563），单纯性脂肪肝组（1.003± 0.427），脂肪性肝炎组（0.345 ± 0.190），其中对照组与单纯性脂肪肝组比P0.05，单纯性脂肪肝组与非酒精性脂肪性肝炎组比P0.05，对照组与非酒精性脂肪性肝炎组比P0.05。 结论：非酒精性脂肪性肝病时，肠粘膜屏障功能降低肠粘膜通透性增加紧密连接蛋白表达减低。 关键词：非酒精性脂肪性肝病，ZO-1，Occludin 1、文献综述 非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD）是目前发达国家慢性肝损害的主要病因,近年来NAFLD患病率不断上升，在富裕地区已达15%，成为仅次于病毒性肝炎的第二大慢性肝病。自肠肝轴的概念的提出，肠粘膜的屏障功能与非酒精性脂肪性肝病的联系逐渐受到重视。本文将对肠粘膜的屏障组成及其生理功能，肠粘膜与非酒精性脂肪性肝病的关系及非酒精脂肪性肝病的诊断及治疗加以综述。 1.1肠粘膜屏障的组成 肠黏膜屏障是由机械屏障、化学屏障、生物屏障、免疫屏障组成的复杂且庞大的防御体系，防止肠道内有害物质对人体的侵袭，在近年的研究中发现机械屏障在其中起到重要作用。胃肠道的各种分泌液，如胃酸、胆汁等及各种消化酶、溶菌酶、黏多糖等化学物质组成了肠粘膜化学屏障，抑制细菌在胃肠道上皮黏附和定植，可以溶解破坏细菌的细胞壁等。肠道的常驻菌群组成了肠道的生物屏障，次屏障深层为厌氧菌，中层为类杆菌、消化链球菌，表层为大肠杆菌、肠球菌。深层的厌氧菌比较稳定，形成的菌膜能阻止表层具有潜在致病性的需氧菌或外来菌黏附于肠粘膜细胞。肠道黏膜免疫屏障是局部免疫系统，包括肠相关淋巴组织和弥散免疫细胞。肠相关淋巴组织是是免疫应答的诱导和活化部位，弥散免疫细胞是肠黏膜的免疫效应部位。肠粘膜机械屏障由肠上皮细胞和细胞间的连接方式包括紧密连接、黏附连接、桥粒等组成。在肠上皮细胞间的连接方式中，紧密连接是肠黏膜屏障的重要结构基础,在维持肠壁通透性中作用最大 [1,2]，当其结构破坏时，可导致肠壁通透性增高。 1.2 肠粘膜细胞紧密连接的结构与生理功能 1.2.1 紧密连接的结构 其位于肠粘膜细胞膜的边缘和顶部,对细胞旁路起到防御作用，掌控相邻细胞间通道的开放[3,4]。紧密连接是一个结构复杂的蛋白质复合体，由超过50种蛋白质组成, 主要的4种跨膜蛋白分别是：occludin、junctional adhesion molecules (JAMs)、claudins、和tricellulin。连接复合物蛋白是：ZO-1、ZO-2、ZO-3、p130、7H6、Symplekin。细胞骨架结构包括有：微管、中丝、微丝。三者共同构成紧密连接复合物[5]。连接符合物蛋白把跨膜蛋白与细胞骨架连接在一起。occludin蛋白大小为60 000-82 000 Da, 是膜蛋白的必要成分, 在细胞外部有两个环, 其细胞内有一个短的N端和一个长的C端，是紧密连接中最早发现的蛋白[6,7]。研究显示, 紧密连接蛋白occludin对于肠粘膜通透性的调节主要由其细胞外环型结构和跨膜结构调节[8]。 JAMs属于免疫球蛋白超家族，在紧密连接中起到至关的作用,可在许多细胞中表达[9,10]。与其细胞外区的配体相连调节细胞旁路通透性[11]。Laukoetter等[12]通过对JAM-A缺失的大鼠进行实验, 发现肠粘膜白细胞渗透及淋巴细胞聚集增多, 肠壁通透增高。 紧密连接蛋白claudin有24种异构体[13]，相邻细胞之间，claudin蛋白与claudin蛋白可以通过链锁形成细胞旁路。研究发现肠粘膜组织特异性的基础是由claudin-claudin这种连接方式形成的，这种连接方式既可以发生