HPD―300大孔吸附树脂对枸杞多糖纯化工艺的影响研究.docVIP

HPD―300大孔吸附树脂对枸杞多糖纯化工艺的影响研究 　　摘 要 通过前期研究结果表明，HPD-300树脂流速为1对枸杞多糖吸附效果最佳。本实验研究在不同温度、多糖浓度、pH值、洗脱剂4个方面对枸杞多糖纯化效果的影响。实验结果表明，最佳工艺为40，多糖浓度为5，pH值为4，洗脱剂为乙醇。在该条件下杂质的吸附率可达89.05%，多糖保留率为87.76%。HPD-300大孔树脂在满足以上条件，对枸杞多糖可以获得较高的纯化效果。 　　关键词 HPD-300大孔吸附树脂 影响因素 除杂率 多糖保留率 　　中图分类号：R943 文献标识码：A 　　研究HPD-300、AB-8、HPD-100、DM301、D101五种不同型号大孔吸附树脂对枸杞多糖纯化工艺的影响，结果表明，在同等条件下，HPD300大孔吸附树脂对枸杞多糖的除杂率和保留率较为理想。大孔吸附树脂是一种有机高聚物吸附剂，是吸附性和筛选性相结合的多孔性高分子材料，其吸附力是范德华力和氢键的作用，筛选性是由于多孔性结构使其对分子大小不同的物质具有选择性的吸附作用。近几年来，大孔吸附树脂对多糖类的纯化研究日趋受到重视，影响吸附洗脱效果的主要因素为PH、上样量、上样液浓度、流速和洗脱剂。本实验研究在不同温度、上样浓度、洗脱剂、PH下，PHD-300对枸杞多糖纯化工艺的影响，确定最优条件。 　　1实验仪器 　　1.1实验材料 　　枸杞采自兰州欣欣干果店，宁夏吴忠汇融枸杞加工厂；HPD-300大孔吸附树脂树脂，均购于沧州宝恩吸附材料科技有限司；葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所，批号。 　　1.2实验仪器 　　Analytik jena Specord 50型紫外-可见分光光度计（美国热电公司）；DH-1600A型台式离心机（上海德洋意邦仪器有限公司）；RE-2000A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；PHS-3C型精密PH计（上海雷磁仪器厂）；GKC型控温水浴锅（上海苏进仪器设备厂监制，南通沪南科学仪器有限公司制造）；KDM型控温电热套（山东鄄城华鲁仪器厂）；DQG-9023A型电热恒温鼓风干燥箱（上海森信实验仪器有限责任公司）；中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）。 　　2方法 　　2.1树脂预处理 　　将HPD-300树脂装柱，加95%乙醇浸泡，洗脱，再浸泡，洗脱，加2%～5%盐酸溶液浸泡，洗脱，水洗至pH值中性，加2%～5%氢氧化钠溶液浸泡，洗脱，水洗至pH值中性。 　　2.2 HPD-300大孔树脂纯化枸杞多糖的最佳条件确定 　　2.2.1静态吸附和解吸单因素试验 　　（1）最佳吸附温度确定 　　分别取HPD-300大孔吸附树脂1.0g5份，各加入50mL、pH=5的枸杞多糖供试品溶液，分别在20、30、40、50、60℃的恒温水浴中静置吸附12h，离心后取滤液测定吸光度，计算除杂率和多糖保留率。结果，选择在40℃下进行试验。温度对HPD-300大孔吸附树脂吸附效果的影响见图1。 　　2.2.2上样液浓度对HPD-300大孔吸附树脂吸附效果的影响 　　分别精密称取HPD-300大孔吸附树脂1.0g5份，各加入pH5、多糖的浓度分别为1、3、5、7、9的5种枸杞多糖溶液5糖0mL，在恒温水浴40℃静置吸附12h。离心后取滤液测定吸光度，并计算除杂率率和多保留率。结果，选择浓度为5的多糖溶液进行动态吸附试验。溶液中多糖浓度对HPD-300大孔吸附树脂吸附效果的影响见图2。 　　2.2.3 PH值对HPD-300大孔吸附树吸附效果的影响 　　分别精密称取HPD-300大孔吸附树脂1.0g5份，各加50mL枸杞多糖供试品溶液，调pH分别为2、3、4、5、7，恒温水浴40℃静置吸附12h，离心后取滤液测定吸光度，并按计算除杂率和多糖保留率。结果，当pH为4时枸杞多糖的脱色效果最好，多糖保留率较高。pH值对HPD-300大孔吸附树脂吸附效果的影响见图3。 　　2.2.4不同洗脱剂对HPD-300大孔吸附树脂解吸附的影响 　　分别采用蒸馏水、pH为4的蒸馏水、乙醇、乙酸乙酯作为洗脱剂，将洗脱液和吸附时的流出液合并，测定吸光度，并计算除杂率和多糖保留率。结果，用乙醇洗脱可以得到较高的除杂率和多糖保留率。不同洗脱剂对HPD-300大孔吸附树脂解吸的影响见表1。 　　3结论 　　HPD300树脂对枸杞多糖纯化的最佳工艺参数为：温度为40 ℃ 、上样液浓度为5、pH值为4、乙醇作洗脱剂。在该条件下，纯化产品枸杞多糖的纯度最高。由图1可看出，枸杞多糖从20 ℃ 吸附呈现上升状态，40 ℃ 达到峰值，继而吸附量又下降。图3可看出，在PH值为3时，多糖保留率相对较高最高，且除杂率最高，因此，综合看来在此情况下，最佳工艺条件