人参皂甙Rh2注射液对荷肝癌(H22)小鼠免疫功能的影响.doc

人参皂甙Rh2 注射液对荷肝癌( H22) 小鼠免疫功能的影响 葛迎春,李晨燕,任慧君,马天舒,刘　平 (大连市中医研究所,大连116013) 作者简介:葛迎春(1961 - ) ,女,长春市人,副研究员,从事中药细胞药理学研究。 出自：特产研究Special Wild Economic Animal and Plant Research 2002年第3期 文章编号:1001 - 4721( 2002) 03 - 0004 - 04 摘　要:本研究以荷肝癌(H22) 小鼠为实验模型,观察人参皂甙Rh2 注射液对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素、NK细胞毒活性和IL - 2 免疫指标的影响。 结果表明:人参皂甙Rh2 注射液能提高荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、增加血清溶血素抗体生成能力、促进小鼠脾NK细胞杀伤活性和IL - 2 活性。人参皂甙Rh2注射液明显提高荷瘤小鼠免疫功能。 关键词:人参皂甙Rh2 ;免疫功能;H22肝癌瘤株 中图分类号:R285. 5 　　　　文献标识码:A 人参具有广泛的药理作用,以往研究表明:人参能提高机体的免疫力[1 ] 。本研究以H22荷瘤小鼠为实验模型,进一步观察人参皂甙Rh2 注射液对荷瘤小鼠免疫功能的影响。 1 　材料和方法 1. 1 　动物　 昆明种小白鼠60 只,体重20. 74 ±0. 77g ,雌雄各半,由大连市药品检定所动物实验基地提供;H22肝癌瘤株由中国医学科学院药物研究所肿瘤室提供;淋巴细胞(YAC - 1) 购自武汉大学 菌种保藏中心。 1. 2 　仪器和试剂　 PRMI - 1640 培养基(Gibco ,USA) ;胎牛血清(FCS ,中国医学科学院血液研究所购进,批号:200004) ;曲拉通(Triton X100 ,Sigma) ;还原型辅酶I (CoI ,NADH ,Sigma) ;阳性对照药:环磷酰胺 (CP ,上海第十二制药厂,批号:011015) ;人参皂甙Rh2 注射液、无色透明液体,由吉林省中医中药研究院提供,批号: 010615 ; 鸡红细胞; Giemsa 染色液。CO2 培养箱(SANYO ,MCO - 175M,Japan) ;超净工作台(CJ - 1 ,苏州长桥净化设备厂) :紫外光度计(TU - 1221 ,北京瑞利分析仪器厂) ;自动酶标度仪(CliniBio ,EC) ;倒置显微镜(OLYPUS ,Japan) ;生物学显微镜;96/ 24 孔培养板(Costar ,USA) ;微量血凝计数板,离心机。 1. 3 　实验分组　 实验随机分成6 组:正常对照组;无菌操作取荷肝癌(H22) 小鼠腹水,用0. 9 %生理盐水稀释至含1 ×107/ ml ,每只右腋皮下接种0. 2ml (2 ×106/ 只) 随机分成H22荷瘤对照组;H22阳性对照组(环磷酰胺,CP) ;H22人参皂甙Rh2 注射液高剂量组、中剂量组、低剂量组,每组10 只。 1. 4 　实验方法 1. 4. 1 　人参皂甙Rh2 注射液对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 　给药方法: 小鼠接种瘤细胞24h 后开始给药, 正常对照组(注射等体积的生理盐水) ; H22荷瘤对照组(注射等体积的生理盐水) ; H22阳性对照组(腹腔注射CP ,20mg/ kg ×3 ,间隔3d 1次) ;H22人参皂甙Rh2 注射液高剂量组(40mg/ kg) 、中剂量组(20mg/ kg) 、低剂量组(10mg/ kg) ,每日静脉注射1 次,连续给药5d ,免疫动物后继续给药5d ,体积均为0. 1ml/ 只。细胞悬液制备:取鸡血置于有玻璃珠的锥形瓶中,朝一个方向充分摇动,以脱纤维,用生理盐水洗涤3 次,离心2000r/ min ,10min ,弃上清,用生理盐水配成20 %(V/ V) 的鸡红细胞悬液。 吞噬功能测定:末次给药后,次日清晨每只鼠腹腔注射20 %鸡红细胞悬液1ml ,轻柔腹部,30min 后,颈椎脱臼处死动物,立即开腹吸取腹腔液滴在玻片上约0. 2ml ,玻片置入37 ℃,孵育30min 后,再用生理盐水中漂洗,除去未贴片细胞,晾干,以1∶1 丙酮甲醇溶液固定,4 %(V/ V)Giemsa - 磷酸缓冲液染色3min ,蒸馏水漂洗晾干。 显微镜下结果判定:油镜下计数巨噬细胞,每张计数100 个,计算吞噬百分率和吞噬指数。 1. 4. 2 　人参皂甙Rh2 注射液对小鼠体液免疫的影响———血清溶血素测定血凝法SRBC:绵羊颈静脉取血,将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中,朝一个方向摇动,以脱纤维,放入4 ℃冰箱保存备用,可保存2 周。免疫动物及血清分离:取羊血,用生理盐水洗涤3 次,每次