000-00微生物检验方法的验证管理规程.doc

目的： 明确微生物检验方法的验证的管理规程，确保所采用的检验方法科学、合理，符合检验要求并能有效控制药品的内在质量。 范围： 适用于本公司对产品的微生物检验方法的验证。 职责： 微生物检验、验证等相关人员对本规程的实施负责。 4 内容 4.1 方法验证工作职责分工 4.1.1 质量控制部负责验证方案的起草、验证工作具体实施以及报告的填写。质量控制部负责人或其指定人员负责验证方案、报告的审核，组织验证工作的实施，对验证工作中出现的问题及时纠正。 4.1.2 验证负责部门负责验证方案、报告的审核，监督验证工作实施，对验证工作中出现的问题提出改进意见并监督落实。确保检验方法验证程序达到符合性要求，程序被遵照执行，并且方法的预定用途被有效的且以文件记录的数据所支持。 4.1.3 质量部负责人负责验证方案及报告的审核批准。 4.2 方法验证 微生物检验方法的验证分为无菌检查方法验证、细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证、控制菌检查方法验证。 4.2.1 无菌检查方法验证 4.2.1.1 方法验证的一般原则 当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若该产品的组分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。 验证时，按《无菌检查法》“供试品的无菌检查”项下的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。 4.2.1.2 菌种及菌液制备 除大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 4 4102〕外，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌种及菌液制备同《无菌检查法》“培养基的适应性检查”项下“菌种及菌液制备”要求。大肠埃希菌的菌液制备同金黄色葡萄球菌。 4.2.1.2 操作方法 4.2.1.2.1 薄膜过滤法 取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于 100 cfu 的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基中，或将培养基加至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。置规定温度培养3～5天，各试验菌同法操作。 4.2.1.2.2 直接接种法 取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别接入小于 100 cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2管，取符合直接接种法培养基用量要求的改良马丁培养基4管，分别接入小于100 cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入每支培养基规定量的供试品量，另1管作为对照，按置规定的温度培养3～5天。 4.2.1.3 结果判断 与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证试验。 4.2.2 细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证 4.2.2.1 方法验证的一般原则 当建立产品的微生物限度检查法时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该产品的细菌、霉菌及酵母菌数的测定。若产品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时，计数方法应重新验证。 验证时，按《微生物限度检查法》“供试液的制备”和“细菌、霉菌及酵母菌计数”项下所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。 4.2.2.2 菌种及菌液制备 同《微生物限度检查法》“计数培养基的适用性检查”项下菌种及菌液制备要求。 4.2.2.3 验证方法 验证试验至少应进行 3 次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。 4.2.2.3.1 试验组 （1）平皿法计数时，取试验可能用的最低稀释级供试液1ml和50～100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。 （2）薄膜过滤法计数时，取规定量试验可能用的最低稀释级供试液，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入 50～100cfu 试验菌，过滤，按薄膜过滤法测定其菌数。 4.2.2.3.2 菌液组：测定所加的试验菌数。 4.2.2.3.3 供试品对照组：取规定量供试液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。 4.2.2.3.4 稀释剂对照组：若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，应增加稀释剂对照组，以考察供试液制备过程中微生物受影响的程度。试验时，可用相应的稀释液替代供试品，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml 供试液含50～100c