叶片不同保存方法对杨树DNA提取效果的影响.docVIP

叶片不同保存方法对杨树基因组DNA提取效果的影响 刘春英，樊军锋*，高建社，周永学 （西北农林科技大学 林学院， 陕西 杨凌 712100） 摘要：以杨树叶片为实验材料，采用改良SDS 法提取基因组DNA，分析5种不同保存方法对样品提取效果的影响。通过A260 /A280、琼脂糖凝胶电泳、ISSR-PCR扩增分析对提取的基因组DNA进行鉴定，认为低温保存杨树叶片是比较理想的方法, 而在远距离野外资源调查收集时，采用硅胶干燥保存样品是比较可行的方法。 关键词：杨树；叶片；基因组DNA；保存方法 中图分类号：S792.11 文献标识码：A The Influence of Total DNA Extraction Effects from Populus L. Leaves in Different Preservation Methods LIU Chun-ying, FAN Jun-feng, GAO Jian-she, ZHOU Yong-xue （College of Forestry , Northwest A＆F University , Yangling , Shaanxi 712100 , China）Abstract: The effects of genomic DNA extraction from poplar leaves were studied under 5 different kinds of conditions for storing samples with improved SDS method. The extracted DNA was tested using the value of A260 /A280, the agarose gelelectrophoresis, and ISSR-PCR amplification. The results showed that low temperature preservation of poplar leaf was the best method. The preservation method used the silica gel was feasible for a long distance in the field resources investigation. Key words: poplar; leaves; genomic DNA; preservation methods DNA提取是分子生物学研究的基本手段，是分子标记、基因克隆等后续操作的基础。植物材料是提取DNA的物质基础，多采用新鲜或冷冻的材料。对于野外远距离采样尤其是进行遗传多样性研究时需对所采集的样品进行保存，有时甚至需要保存较长时间。新鲜材料在旅途中可能枯萎、腐烂, 特别是一些离体材料极易受DNA酶的作用,从而导致DNA降解, 而无法获得高质量的DNA。若携带液氮或冰壶冻存植物材料非常不方便。有研究表明，用硅胶干燥[1-3]、室温风干[4]的叶子可以用于基因组DNA的提取。从杨树新鲜叶片中提取基因组DNA技术已比较成熟，但对于杨属植物从硅胶保存、室温风干等干叶片中提取DNA在胡杨中曾有过研究[4]，但对于杨属植物的其他种，尚未报道。植物基因组中DNA的提取方法有多种，如CTAB法[5-7]，SDS法[8,9]，高盐低pH法[10]等，本试验采用改良的SDS法提取杨树叶片基因组DNA，比较5种不同保存方法的优缺点，选出适合杨树叶片的保存方法，为在分子水平上对杨树进行研究奠定基础。 1 材料与方法 1.1 试验材料 本研究材料为银白杨I-101和84K杨的叶片，来自西北农林科技大学林学院试验站，取杨树嫩叶分别于-80℃冻存、硅胶脱水干样、25℃室温自然晾干、60℃烘干及-20℃冻存共5种方法保存。保存时间为60天，鲜叶为对照。 1.2 方法 DNA提取采用改良的SDS方法[11-13]，用于提取不同方法保存的叶片基因组DNA，每种方法保存的样品重复提取4次。 1.2.1总DNA的提取 取研磨的干粉（新鲜叶片0.1g，干叶片0.03g）加入2ml的离心管中，加入1ml 65℃预热的 1%SDS（0.2M Tris-HCl,0.25M NaCl,0.1M EDTA,1%SDS,0.5%PVP,2%β-巯基乙醇）提取缓冲液，轻轻颠倒混匀，置于65℃水浴锅中，每隔5min轻轻摇动，30min后取出，室温冷却2min，8000rpm离心10min，取上清；加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），充分混匀，8000rpm离心10min，取上清；加入等体积的氯仿/异戊醇（24：1），充分混匀，8000rpm离心10min，取上清于1.