超高效液相色谱―串联质谱法测定水产品中甜蜜素.docVIP

超高效液相色谱―串联质谱法测定水产品中甜蜜素 　　摘要 建立了一种采用超声波提取，经正己烷萃取除去油脂有机物，由超高效液相色谱-串联质谱法定量准确、快速检测水产品中甜蜜素的方法。甜蜜素含量在10～100 ng/mL的范围内与峰面积有良好的线性关系，相关系数为0.999 7，检出限为0.01 mg/kg。添加水平分别为0.1、0.2、0.5 mg/kg的样品加标回收率为83.3%～95.6%，测定结果的相对标准偏差均小于5%（n=6）。该方法简便、准确、高效，适用于水产品中甜蜜素测定。 　　关键词 超高液相色谱-串联质谱法；水产品；甜蜜素 　　中图分类号 TS207.3 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）11-0309-01 　　甜蜜素（sodium cyclamate），化学名称为环己基氨基磺酸钠，属人工合成的磺胺类无营养型食品添加剂[1]。其口感好、甜度是蔗糖的30～40倍，价格低廉，被广泛应用到甜味食品中。但人工合成甜味剂的安全性从20世纪70年代开始受到质疑，研究发现食用甜蜜素可能有致癌、致畸、损害肾功能等副作用，美国、英国、日本等经济发达国家开始禁止在食品中使用甜蜜素，中国、欧盟等40余个国家、地区对此也分别作出限制[2]。 　　本研究建立了一种采用超声波提取，经正己烷萃取处去油脂类有机物，由超高效液相色谱-串联质谱法定量准确、快速检测水产品中甜蜜素的方法。其检出限大大降低，结果准确可靠，且样品无需固相萃取过程就可以进样，节约了检测成本，节省了分析时间，提高了分析效率，是控制出口水产品中甜蜜素含量的有效测定方法。为水产品出口企业在加工过程控制甜蜜素添加，满足出口国的甜蜜素的含量要求提供了有力的技术支持。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器与试剂 　　1.1.1 试验仪器。Agilent 6210A串联三重四级杆质谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；T25 basic高速均质器（德国 IKA实验仪器公司）；Agilent 1290超高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有效公司）；BS2202S电子天平（北京赛多利斯有限公司）；SB-25-12DTS超声波提取器（宁波新芝生物科技股份有限公司）；L530台式低速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；XK96-A快速混匀器（姜堰市新康医疗器械有限公司）。 　　1.1.2 试验试剂。乙腈、甲酸均为色谱纯（美国Tedia公司）；甜蜜素标准物质：纯度99.0%（德国Dr.Ehrenstorfer公司）；试验用水为超纯水。 　　1.2 标准溶液配制 　　准确称取0.020 0 g甜蜜素标准物质，用纯水溶解定容至100.0 mL，得到浓度为200 μg/mL的标准储备液；准确移取500 μL标准储备液用纯水稀释定容至100.0 mL，得到浓度为1.0 μg/mL的标准中间液，再逐级稀释成浓度分别为10、20、40、80、100 ng/mL的系列标准工作溶液供HPLC-MS/MS测定。 　　1.3 样品处理 　　称取1 g均质处理（转速5 000 r/min）后的糜样（精确至0.01 g），置于50 mL具塞塑料离心管中，加入10 mL纯水，旋涡混匀后，超声提取15 min，于4 000 r/min离心5 min；上清液经定量滤纸过滤后，取1 mL滤液加入3 mL正己烷涡旋萃取，滤液过0.2 μm PTFE滤膜，供UPLC-MS/MS测定。 　　1.4 色谱与质谱条件 　　色谱柱：Agilent ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18（3.0 mm×100 mm，1.8 μm）；流动相：0.1%甲酸水溶液-乙腈（体积比70∶30）；流速：0.5 mL/min；进样量：2 μL；柱温：25 ℃。 　　多反应监测MRM；负离子模式；电喷雾离子源（ESI）；干燥气流速：10 L/min；干燥气温度：350 ℃；毛细管电压：3 500 V；雾化器压力：50 psi；甜蜜素的定性定量离子对、碎裂电压、碰撞能量等参数：母离子为178.1，子离子为80.0，驻留时间为200 ms，碎裂电压为120 V，碰撞能量为25 eV。 　　2 结果与分析 　　2.1 前处理过程的优化 　　检测标准GB/T 5009.97―2003及SN/T 1948―2007中对甜蜜素的样品处理均采用水浸泡或超声直接处理后检测。在初期试验中对水产品采用前2种方法直接处理，得到的添加回收率均极低，故不适合直接应用上述检测方法。分析原因，2个标准中的甜蜜素的检测对象限定在饮料、糕点和凉果等基质，而水产品中蛋白质、脂肪含量高，属于复杂基质，待测甜蜜素易被大分子蛋白吸附损失或被油脂有机分子包裹后在色谱柱中的保留性质被改变，使得最终质谱检测到的甜蜜素极低。